Ujian air kencing dan air liur untuk batuk kering

Pelbagai ujian yang berbeza untuk tuberkulosis dijelaskan bukan dengan mudah diagnosis penyakit ini, tetapi dengan liciknya. Sejak zaman purba, orang telah berusaha mencari cara untuk mengenal pasti phthisis pada peringkat awal dan oleh itu dijalankan pelbagai kajian pesakit, sesetengahnya benar-benar terbiasa sebagai kaedah untuk mendiagnosis penyakit atau sebagai cara untuk memerhatikan proses penyakit.

Apakah ujian air kencing dan air liur?

Ujian tangki untuk tuberkulosis air liur dan air kencing dilakukan untuk mengesan kehadiran patogen di dalam badan. Pada masa yang sama, tujuan kajian ini lebih cenderung untuk mengesahkan penyakit dengan gejala yang ada, dan tidak mencarinya, kerana terdapat banyak kaedah lain yang lebih dipercayai untuk diagnosis pencegahan awal.

Di samping itu, doktor boleh menjalankan ujian air kencing atau sputum, dan juga analisis air liur untuk TBC untuk mengenal pasti proses peralihan bentuk tertutup penyakit tersebut kepada pembukaan, yang dicirikan oleh pembebasan sejumlah besar bakteria dengan cecair semulajadi dan tinja pesakit, dan oleh itu menjadi sangat epidemiologi berbahaya kepada orang lain.

Uji air kencing

Jawapan kepada persoalan bagaimana untuk menguji ujian air kencing untuk tuberkulosis adalah agak mudah. Urin untuk tuberkulosis dikumpulkan seperti apa-apa analisis umum cecair ini, biasa kepada semua orang dari zaman kanak-kanak:

  1. Ia perlu di pagi hari untuk mengumpul bahagian pertama air kencing, sambil mengumpul bahagian tengah sahaja, dan bukannya yang pertama atau terakhir.
  2. Sebelum mengumpul, perlu membersihkan kedua-dua bekas dan organ kencing itu dengan teliti supaya tiada apa-apa yang boleh masuk ke dalam balang: protein, darah, kuman, dan sebagainya.
  3. Jumlah cecair yang diperlukan untuk kajian hanya 50-100 ml, jadi anda tidak boleh membawa satu setengah liter air kencing.

OAM boleh diambil di mana-mana klinik, bagaimanapun, bacilli tuberkulosis hanya boleh didapati di makmal khas yang tidak terdapat di setiap tempat di Rusia. Keputusan biasa kajian ini adalah seperti berikut:

  1. Warna: kuning, cerah kuning atau jerami.
  2. Ketelusan: tinggi.
  3. Bau: unsharp.
  4. Tindak balas PH: 4-7.
  5. Ketumpatan: 1012-1022 g / l.
  6. Protein: tidak, tetapi kadang kala sehingga 0.033 g / l boleh diterima.
  7. Glukosa: sehingga 0.8 mmol / l.
  8. Ketone bodies: no.
  9. Bilirubin: no.
  10. Urobilinogen: 5-10 mg / l.
  11. Hemoglobin: tidak.
  12. Erythrocytes: pada wanita, nilai maksimum yang dibenarkan adalah sehingga tiga, dan pada lelaki, sehingga 1 terlihat.
  13. Leukosit: bilangan badan yang dibenarkan dalam bidang pandangan adalah sehingga 6 orang wanita dan sehingga tiga lelaki.
  14. Sel epitel: sehingga 10 pcs. dalam penglihatan.
  15. Silinder: tiada atau tunggal hyaline hadir.
  16. Garam: tidak.
  17. Bakteria: tidak.
  18. Cendawan: tidak.
  19. Parasit: tidak, tetapi jika ada, maka ia tidak menakutkan: hanya dalam kes ini, terapi dengan ubat anthelmintik dijalankan.

Kadar OAM untuk tuberkulosis biasanya tetap sama. Satu-satunya pengecualian adalah bentuk akut penyakit, apabila perubahan urin disebabkan gangguan organ dalaman, serta lesi kronik paru-paru atau tulang, apabila terdapat tanda-tanda amyloidosis dalam analisis - pelanggaran metabolisme protein, di mana hasil pemeriksaan akan mengandungi protein.

Pengecualian adalah tuberkulosis buah pinggang atau saluran kencing - bentuk ekstrapulmonary yang paling biasa penyakit ini, yang disebabkan oleh pemindahan jangkitan dari aliran darah, di mana urinalisis kepada tuberkulosis sangat berbeza. Dalam kes ini, fenomena berikut diperhatikan:

  • tindak balas asid yang berterusan;
  • leukocyturia - leukosit dalam air kencing;
  • proteinuria - protein dalam air kencing;
  • erythrocyturia - darah dalam air kencing;
  • pyuria - nanah dalam air kencing.

Juga, dalam bentuk akut penyakit ini atau semasa tuberkulosis buah pinggang dan saluran kencing dalam air kencing, terdapat bentuk aktif patogen patogen, yang ditentukan oleh kaedah pewarnaan mengikut Zil-Nelson.

Ujian air liur

Malah, BAC tidak menghasilkan analisis air liur untuk tuberkulosis. Analisis air liur selalunya tidak diketahui orang memanggil kajian sputum untuk tuberkulosis. Daripada uji kaji, analisis air liur untuk tuberkulosis boleh dilakukan hanya dalam kes kanak-kanak baru yang sangat kecil yang tidak dapat meludah ekspektoran kerana ia secara automatik menelan segera sebaik sahaja selepas ekspektasi. Walau bagaimanapun, dalam kes ini, doktor hanya mengambil biopsi tisu atau menarik balik rembesan paru-paru dengan siasatan, dan jangan mengamuk dengan air liur.

Analisis sputum patogen juga dilakukan menggunakan kaedah Ziehl-Nelson. Sebagai tambahan kepada bacilli, beberapa tanda patologi paru-paru dapat dipertimbangkan dengan mata kasar: serpihan berserat, nanah, darah, kepingan tisu dan apa yang dipanggil lentil - kemasukan besar dengan pin kepala atau bentuk bulat yang lebih kecil, di mana biasanya ada banyak bacilli.

Kaedah pewarnaan Ziehl-Nelson

Kaedah pewarnaan Ziel-Nelson didasarkan pada rintangan asid Mycobacterium tuberculosis, yang boleh diwarnai hanya dengan rawatan haba. Semasa kajian ini, tisu badan, sputum, air kencing, darah, atau apa-apa bahan lain yang menganalisis kehadiran MBT perlu dilakukan dibiarkan dalam persekitaran yang baik untuk menanam bakteria untuk pembiakan, jika mereka berada di sana, sudah tentu, dan kemudian dipanaskan dan bernoda. Selepas itu, semuanya disimpan dalam asid sehingga perubahan warna dan lagi dicat tanpa pemanasan kepada warna lain. Akibatnya, pejabat agak mudah untuk mengesan, kerana mereka tetap warna warna pertama dan menonjol dengan baik terhadap latar belakang umum.

Notebook Phthisiology - Tuberkulosis

Semua yang anda ingin ketahui mengenai tuberkulosis

Ujian darah dan air kencing untuk batuk kering

V.A. Koshechkin, Z.A. Ivanova

Unsur-unsur darah merah, sebagai peraturan, berubah sedikit dengan tuberkulosis. Hanya selepas kehilangan darah yang teruk dari paru-paru atau usus, anemia dapat diperhatikan. Pengurangan hemoglobin sedikit boleh dilihat dalam bentuk kronik tuberkulosis pulmonary cavernous.

Salah satu indikator aktiviti proses tabung adalah ESR (kadar pemendapan erythrocyte). ESR dipercepatkan bukan hanya berkaitan dengan aktiviti dan tahap proses segar semasa, tetapi juga dengan peningkatan proses kronik, terutamanya fibro-cavernous.

Elemen pecahan leukosit dalam darah bertindak balas terhadap proses suntikan yang lebih aktif.
Konvensional, terdapat tiga fasa perubahan dalam pecahan leukosit dalam darah yang dikaitkan dengan sifat lesi dalam tuberkulosis pulmonari.
1. Fasa neutrofil perjuangan. Dalam darah, kadar neutrofil meningkat, hasilnya terdapat pergeseran formula ke kiri. Eosinophils tidak hadir, bilangan limfosit dan monosit dikurangkan.
2. Fasa monocytes - mengatasi jangkitan. Dalam darah, bilangan limfosit meningkat, formula darah beralih ke kiri, jumlah neutrophil dikurangkan, eosinofil tunggal dikesan.
3. Pemulihan Fasa. Kadar lymphocytes dan eosinophils meningkat. Tuntutan darah secara beransur-ansur menormalkan.
Pemisahan ini menjadi fasa hanya mencerminkan tindak balas darah keseluruhan.

Pergeseran neutrofil nuklear dalam tuberkulosis
Sebagai tambahan kepada kuantitatif, kumpulan neutrophil mempunyai ciri kualitatif, yang lebih nipis dan lebih awal menunjukkan pelbagai proses patologi.

Tuberkulosis dewasa biasanya merupakan proses menengah, selalunya ia hanya menyebabkan peningkatan neutrophil dalam darah. Dengan bentuk-bentuk dan fenomena infiltratif-pneumon yang terputus dari perpecahan tisu paru-paru, pergeseran neutrofil di sebelah kiri didedahkan dengan jelas dan boleh mencapai sehingga 20-30% teras-teras.

Infiltrat pulmonari tidak hancur, dan bentuk tumpuan tuberkulosis dalam tempoh pengesanan pertama atau eksaserbasi pada suhu subfebril dan gangguan fungsi kelas rendah memberi pergeseran yang kurang jelas. Walau bagaimanapun, unsur-unsur yang tinggal hemogram tidak dapat mengesan keabnormalan sama sekali. Oleh itu, definisi menyeluruh mengenai pergeseran nuklear menjadi penting dalam tuberkulosis.

Doktrin peralihan neutrofil nuklear telah dikembangkan oleh Arnet (1905) berdasarkan kajian darah dalam pelbagai jangkitan, termasuk tuberkulosis.

Membuat pengiraan yang kompleks dengan banyak sketsa, Arneth perhatikan beberapa ketetapan dalam konfigurasi nukleus neutrofil.

Darah seseorang yang sihat mengandungi:

  • 5% neutrofil dengan spanduk yang tidak dikenali, nukleus tidak bersegmen (kelas I);
  • 35% neutrophils dengan dua segmen yang dihubungkan dengan penyambungan thread seperti (kelas II);
  • 41% daripada neutrofil dengan tiga segmen (kelas III);
  • 17% neutrofil dengan empat segmen (kelas IV);
  • 2% neutrofil dengan lima segmen (kelas V).

Selain segmen teras, Arnet mengambil kira bentuknya. Oleh itu, untuk kelas pertama, beliau mengetengahkan beberapa subclass mengikut tahap indentasi nukleus yang tidak dibahagi. Kelas-kelas yang tinggal dibahagikan kepada subclass bergantung kepada bentuk segmen.

Dalam jangkitan yang berkadar dengan keterukan mereka, bilangan bentuk berbilang segmen berkurangan, bilangan yang terbahagi dengan rendah (2-3 segmen) dan tidak dibahagikan (sel yang relatif muda) meningkat.

Dalam skema Arneth, bilangan kelas netrohil yang ditonjolkan ditunjukkan di sebelah kiri; di sebelah kanan, bilangan sel kelas II terletak, kemudian kelas III, dan sebagainya. Oleh itu, dengan peningkatan dalam bentuk yang tidak terbahagi dan rendah, bilangan sel di sebelah kiri litar bertambah dan ada "pergeseran kiri".

Analisis air kencing
Kencing manis dalam pesakit tuberkulosis hampir normal. Perubahan patologi dalam air kencing boleh menjadi kekalahan tuberkulosis buah pinggang atau saluran kencing.
Pada pesakit dengan bentuk kronik tuberkulosis pulmonari, tanda amyloidosis dapat dikesan.

3.7 Analisis darah dan air kencing.

Unsur-unsur darah merah, sebagai peraturan, berubah sedikit dengan tuberkulosis. Hanya selepas kehilangan darah yang teruk dari paru-paru atau usus, anemia dapat diperhatikan. Pengurangan hemoglobin sedikit boleh dilihat dalam bentuk kronik tuberkulosis pulmonary cavernous. Salah satu penunjuk aktiviti tabung adalah ESR (kadar pemendapan erythrocyte). ESR dipercepat tidak hanya berkaitan dengan aktiviti dan sejauh mana proses segar sekarang, tetapi juga dengan peningkatan proses kronik, terutamanya fibro-cavernous. Elemen pecahan leukosit dalam darah bertindak balas terhadap proses suntikan yang lebih aktif.

Konvensional, terdapat tiga fasa perubahan dalam pecahan leukosit dalam darah yang berkaitan dengan sifat lesi dalam tuberkulosis pulmonari:

  1. Neutrophilic - fasa perjuangan. Dalam darah, perkadaran neutrofil meningkat, akibatnya ada perubahan dalam formula darah ke kiri. Eosinophils tidak hadir, bilangan limfosit dan monosit dikurangkan. Lymphopenia adalah ciri-ciri bentuk tuberkulosis progresif.
  2. Fasa monocytes - mengatasi jangkitan. Dalam darah, bilangan limfosit meningkat, formula darah beralih ke kiri, jumlah neutrophil dikurangkan, eosinofil tunggal dikesan.
  3. Fasa pemulihan Kadar lymphocytes dan eosinophils meningkat. Tuntutan darah secara beransur-ansur menormalkan.

Pembahagian sedemikian ke fasa hanya mencerminkan tindak balas darah umum, yang tidak mencerminkan keseluruhan kerumitan tindak balas darah terhadap jangkitan tuberkulosis kronik.

Pergeseran neutrofil nuklear dalam tuberkulosis.
Sebagai tambahan kepada kuantitatif, kumpulan neutrophil mempunyai ciri kualitatif, yang lebih nipis dan lebih awal menunjukkan pelbagai proses patologi. Tuberkulosis dewasa, biasanya proses pasca-primer, yang paling sering menyebabkan hanya peningkatan neutrophil dalam darah. Dengan bentuk infiltratif-pneumonik dan dengan fenomena perpecahan tisu paru-paru, pergeseran neutrofil di sebelah kiri didedahkan dengan jelas dan dapat mencapai hingga 20-30% dari tikaman.

Inflasi paru tanpa disintegrasi dan bentuk tumpuan tuberkulosis dalam tempoh pengesanan atau eksaserbasi pertama mereka pada suhu subfebril dan gangguan fungsi kelas rendah memberi pergeseran yang kurang jelas. Pada masa yang sama, unsur-unsur yang tinggal hemogram mungkin tidak mempunyai keabnormalan. Oleh itu, definisi menyeluruh mengenai pergeseran nuklear mendapat nilai diagnostik dalam tuberkulosis.
Kajian pergeseran nuklear nukrophilic telah dikembangkan oleh Arneth (Arneth) berdasarkan kajian darah dalam pelbagai jangkitan dan terutama dalam tuberkulosis. Membuat pengiraan yang kompleks dengan banyak sketsa, Arneth perhatikan beberapa ketetapan dalam konfigurasi nukleus neutrofil. Dalam darah orang yang sihat, neutrofil dengan spanduk yang tidak tercemar, nukleus nonsegmented (kelas I) adalah 5%; neutrofil dengan dua segmen yang dihubungkan dengan penyambungan filiform (kelas II) - 35%, kelas III - 41%, kelas IV - 17% dan kelas V - 2%. Dalam jangkitan yang berkadar dengan keterukan mereka, bilangan banyak bentuk yang tersegmentasi berkurang, bilangan segmen kecil (2-3 segmen) dan tak bertegangan bertambah. Dalam skema Arneth, bilangan neutrophil tidak terkawal ditulis di sebelah kiri; di sebelah kanan adalah bilangan sel kelas II, kemudian kelas III, dan sebagainya. Oleh itu, dengan peningkatan dalam bentuk yang tidak dibahagi dan kurang dibahagian, jumlah sel di sebelah kiri litar meningkat dan "pergeseran kiri" terjadi.

Tanda-tanda proses tabung, sebagai tambahan kepada perubahan dalam hemogram, adalah hiponatremia. Ia adalah peralihan metabolik yang paling khas. Penyebab hiponatremia adalah perkembangan bahan hormon antidiuretik yang dipengaruhi oleh tuberkulosis pulmonari. Terutama secara intensif bahan ini dihasilkan dalam tempoh bentuk yang merosakkan kes yang biasa.

Analisis air kencing
Kencing manis dalam pesakit tuberkulosis hampir normal. Perubahan patologi dalam air kencing boleh menjadi kekalahan tuberkulosis buah pinggang atau saluran kencing. Protein, leukosit, MBT dikesan dalam air kencing. Pada pesakit dengan tuberkulosis kronik paru-paru atau tulang, tanda-tanda amyloidosis dapat dikesan (pururia tahan, hematuria kasar).

Diagnosis tuberkulosis dalam analisis darah dan air kencing

Unsur-unsur darah merah, sebagai peraturan, berubah sedikit dengan tuberkulosis. Hanya selepas kehilangan darah yang teruk dari paru-paru atau usus, anemia dapat diperhatikan. Pengurangan hemoglobin sedikit boleh dilihat dalam bentuk kronik tuberkulosis pulmonari cavernous.

Salah satu indikator aktiviti proses tabung adalah ESR (kadar pemendapan erythrocyte). ESR dipercepatkan tidak hanya berkaitan dengan aktiviti dan tahap proses segar semasa, tetapi juga dengan peningkatan proses kronik, terutama fibrocavernous.

Elemen pecahan leukosit dalam darah bertindak balas terhadap proses suntikan yang lebih aktif.

Konvensional, terdapat tiga fasa perubahan dalam pecahan leukosit dalam darah yang dikaitkan dengan sifat lesi dalam tuberkulosis pulmonari.

  1. Fasa Neutrophil perjuangan. Dalam darah, kadar neutrofil meningkat, hasilnya terdapat pergeseran formula ke kiri. Eosinophils tidak hadir, bilangan limfosit dan monosit dikurangkan.
  2. Fasa monocytes - mengatasi jangkitan. Dalam darah, bilangan limfosit meningkat, formula darah beralih ke kiri, jumlah neutrophil dikurangkan, eosinofil tunggal dikesan.
  3. Fasa pemulihan Kadar lymphocytes dan eosinophils meningkat. Tuntutan darah secara beransur-ansur menormalkan.

Pemisahan ini menjadi fasa hanya mencerminkan tindak balas darah keseluruhan.

Pergeseran neutrofil nuklear dalam tuberkulosis

Sebagai tambahan kepada kuantitatif, kumpulan neutrophil mempunyai ciri kualitatif, yang lebih nipis dan lebih awal menunjukkan pelbagai proses patologi.

Tuberkulosis dewasa biasanya merupakan proses menengah, selalunya ia hanya menyebabkan peningkatan neutrophil dalam darah. Dengan bentuk-bentuk dan fenomena infiltratif-pneumon yang terputus dari perpecahan tisu paru-paru, pergeseran neutrofil di sebelah kiri didedahkan dengan jelas dan boleh mencapai sehingga 20-30% teras-teras.

Infiltrat pulmonari tidak hancur, dan bentuk tumpuan tuberkulosis dalam tempoh pengesanan pertama atau eksaserbasi pada suhu subfebril dan gangguan fungsi kelas rendah memberi pergeseran yang kurang jelas. Walau bagaimanapun, unsur-unsur yang tinggal hemogram tidak dapat mengesan keabnormalan sama sekali. Oleh itu, definisi menyeluruh mengenai pergeseran nuklear menjadi penting dalam tuberkulosis.

Doktrin peralihan neutrofil nuklear telah dikembangkan oleh Arnet (1905) berdasarkan kajian darah dalam pelbagai jangkitan, termasuk tuberkulosis.

Membuat pengiraan yang kompleks dengan banyak sketsa, Arneth perhatikan beberapa ketetapan dalam konfigurasi nukleus neutrofil. Darah seseorang yang sihat mengandungi:

  • Neutrophil 5% dengan wafer yang tidak tercemar, nukleus tidak bersegmen (kelas I);
  • 35% neutrophils dengan dua segmen yang dihubungkan dengan penyambungan thread seperti (kelas II);
  • 41% daripada neutrofil dengan tiga segmen (kelas III);
  • 17% neutrofil dengan empat segmen (kelas IV);
  • 2% neutrofil dengan lima segmen (kelas V).

Selain segmen teras, Arnet mengambil kira bentuknya. Oleh itu, untuk kelas, dia menyampaikan beberapa subkelas mengikut tahap kemurungan nukleus yang tidak dibahagi. Kelas-kelas yang tinggal dibahagikan kepada subclass bergantung kepada bentuk segmen.

Dalam jangkitan, mengikut keparahan mereka, bilangan bentuk berbilang segmen berkurangan, bilangan segmen rendah (2-3 segmen) dan tidak dibahagikan (sel yang relatif muda) meningkat. Dalam skema Arneth, bilangan kelas netrohil yang ditonjolkan ditunjukkan di sebelah kiri; kanan adalah bilangan sel kelas II, kelas III dan kemudian t. d. Oleh itu, peningkatan dalam bentuk bukan dibahagikan dan nombor malosegmentirovannyh sebelah kiri kenaikan sel litar dan terdapat "shift kiri".

Analisis air kencing

Kencing manis dalam pesakit tuberkulosis hampir normal. Perubahan patologi dalam air kencing boleh menjadi kekalahan tuberkulosis buah pinggang atau saluran kencing.

Pada pesakit dengan bentuk kronik tuberkulosis pulmonari, tanda amyloidosis dapat dikesan.

35. Nilai diagnostik ujian darah dan air kencing pada pesakit dengan batuk kering.

Ujian darah Hemoglobin dan sel darah merah dalam kebanyakan kes tetap tidak berubah, dengan pengecualian kes disertai dengan kehilangan darah akut. Penunjuk yang menunjukkan adanya proses tabung aktif adalah kadar sedimentasi eritrosit. ESR dipercepatkan adalah ciri bukan sahaja tuberkulosis aktif yang baru, tetapi juga untuk memperjelas proses kronik. Penunjuk baki ujian darah berbeza-beza bergantung pada sifat kecederaan paru-paru. Perubahan dalam petunjuk perifer. darah ketika tuberk. Walaubagaimanapun, hemogram membantu diagnosis. fasa tuberk. proses dan menilai beban. alirannya. Orang yang ditinjau untuk tuberkulosis dan pesakit dengan tuberkulosis. ditugaskan kepada baji biasa. ujian darah dengan definisi ESR, kandungan eritr. dan leukot, kepekatan hemoglob dan pengiraan formula leukosit. Pesakit dengan batuk kering di hadapan pesakit direkomendasikan. menentukan jumlah reticulocytes untuk menilai pertumbuhan semula. kebolehan sumsum tulang, dalam kes diagnostik pembezaan - kiraan platelet. Perubahan hematologi. penunjuk bergantung, dalam satu tangan, penyetempatan, sifat dan keterukan inf. proses, yang lain - dari keadaan badan, rizab pampasannya. Hemogram har. agak fasa proses daripada bajinya. borang. Sebagai contoh, pada pesakit dengan bentuk tuberkulosis yang merosakkan umum dengan proses pampasan dan ketiadaan keradangan baru. Perubahan dalam gambar darah boleh menjadi normal. Tiub mengasah. Proses ini biasanya disertai dengan pergeseran strok neutrophil, limfopenia dan peningkatan ESR. Jumlah kandungan leukosit na. kebanyakan pesakit dalam julat normal. Hanya kursus akut dan teruk yang dicirikan oleh peningkatan kandungan leukosit dalam darah kepada 15 x 109 / l. Pergeseran neutrophil daripada formula leukosit ke kiri pada masa yang sama menjadi lebih penting. Dalam kes-kes yang teruk penyakit (terutamanya dalam tuberkulosis miliary), reaksi leukemoid jenis myeloid mungkin berlaku. Pelepasan proses akut menyebabkan normalisasi perubahan ini, rupa lymphocytosis. Neutropenia dan limfositosis dapat dilihat dalam tuberkulosis yang disebarkan hematogenik kronik dan fokal.

Analisis air kencing Dalam analisis air kencing dalam pesakit dengan tuberkulosis pulmonari, tiada penyimpangan yang ketara dari norma. Perubahan hanya muncul dalam lesi berbahaya buah pinggang dan saluran kencing. Urinalisis rutin untuk tuberkulosis tidak hanya perlu jika kerosakan buah pinggang disyaki. Pada masa lalu kes dia adalah satu. untuk diagnosis awal. Kehadiran nanah yang berterusan dalam air kencing, dan, yang paling penting, tuba. Bakteria, sudah tentu, menunjuk kepada tab mandi. buah pinggang. Walau bagaimanapun, kadang-kadang diperlukan untuk mengulangi. Issled. air kencing untuk mengesan ahli patologi. mendapati; jadi dengan beberapa. bentuk tuberkulosis ujian air kencing bulanan (borang penyebaran, rumit utama kompleks). Perubahan kecil dalam air kencing dalam bentuk jejak protein, tunggal. leukosit dan erythrocyte segar secara berkala dapat dikesan sebagai fenomena mabuk umum. Akhirnya, beberapa tindak balas dengan air kencing memberi tanda-tanda keterukan proses itu. Di antaranya adalah tindak balas reaksi diazo semasa generalisasi. bentuk tuberkulosis, terutamanya dengan tuberkulosis miliary.

Tidak syak lagi, nilai prognostik dalam perjalanan tuberkulosis mempunyai penyelesaian urokromogenik. Ia sangat mudah, dan ini adalah kelebihannya. Dia dihasilkan. seterusnya Cara: mengambil air kencing yang ditapis dan cairkannya sebanyak 10 kali. Tuangkan dua tiub, satu yang berfungsi sebagai kawalan, dan larutan kalium permanganat 1: 1000 ditambah kepada yang lain. Reaksi positif dalam tiub menghasilkan penahan kanari tajam, yang sangat jelas dilihat apabila dibandingkan dengan kawalan. Ia adalah perlu untuk mengambil kira hanya menyatakan dengan jelas. pewarna. Mekanisme tindak balas adalah bahawa potassium permanganate mengoksidasi urokromogen tanpa warna dalam air kencing, yang ketara meningkat dalam kes tuberkulosis progresif.

Apakah ujian untuk batuk kering pulmonari?

Ujian makmal melepasi semua pesakit. Oleh kerana patologi berjangkit kepada orang lain, kajian bahan biologi yang tepat pada masanya menyumbang kepada ketepatan diagnosis dan membantu mengawal kursus rawatan.

Senarai ujian makmal untuk tuberkulosis pulmonari

Senarai ujian untuk batuk kering

Senarai ujian wajib untuk batuk kering pulmonari adalah seperti berikut:

  • pemeriksaan dahak - di hadapan rongga, badan padi, protein, serat elastik, garam kalsium terdapat di dalamnya;
  • analisis eksudat - menunjukkan neutrofil dan sel endothelial dengan dominasi leukosit;
  • analisis lavage bronchoalveolar menunjukkan bilangan makrofaj alveolar yang berkurangan dengan peningkatan neutrophils dengan proses aktif dalam proses tuberkulosis, dan dengan penunjuk makrofag yang tidak aktif meningkat sedikit;
  • ujian serologi, atau immunoassay enzim, diuji untuk menentukan immunoglobulin serum untuk antigen mikobakteria. Nisbah titer antibodi diagnostik kepada agen penyebab penyakit melebihi nilai 1: 8.

Apakah keputusan ujian darah?

Oleh kerana analisis biokimia darah dalam tuberkulosis pulmonari, pakar mempunyai keupayaan untuk menentukan arah aliran perubahan protein dan pecahannya dalam serum darah. Ini menentukan bentuk dan peringkat penyakit ini. Kadar asid urik, tembaga, kolesterol dan tahap lysozyme melebihi. Aktiviti protein enzim kinase dan angiotensin diperhatikan. Asidosis pernafasan berkembang disebabkan oleh penurunan dalam pH dan peningkatan pCO2.

Berkenaan dengan hemoglobin, pengurangan mereka, yang membawa kepada perkembangan anemia, tidak tipikal untuk proses tuberkulosis.

Urinalisis pada pesakit batuk kering

Adakah ujian air kencing untuk tuberkulosis pulmonari?

Perkumuhan urin dalam pesakit berbahaya masih normal. Perubahan patologi biasanya berlaku jika saluran buah pinggang dan saluran kencing terlibat dalam proses tabung. Pada pesakit dengan bentuk penyakit kronik, tanda-tanda amyloidosis dapat dikesan semasa proses pengajaran.

Apakah analisis air kencing untuk tuberkulosis pulmonari, maklumat apa yang mungkin menunjukkan perkembangan dalam tubuh proses patologi?

  1. Ketumpatan adalah 1,015 - 1,025.
  2. Kehadiran tunggal eritrosit dibenarkan, pada kanak-kanak - tidak lebih dari 5.
  3. Sel darah putih tidak boleh melebihi 2 unit, untuk wanita dan perempuan - sehingga 5 unit.
  4. Nilai garam tidak penting.
  5. Nilai permulaan epitel rata adalah sehingga 5 unit.

Apakah ujian darah untuk tuberkulosis pulmonari

Tuberkulosis adalah penyakit berbahaya dan sukar untuk dirawat. Keberkesanan rawatan bergantung kepada bagaimana ia dapat dikesan tepat pada masanya. Tiada siapa yang diinsuranskan terhadap jangkitan, sememangnya semua orang boleh menjadi sakit - orang dewasa, kanak-kanak, orang tua.

Dengan tidak adanya rawatan yang tepat pada masanya, bentuk yang tertutup akan menjadi satu yang berbahaya, oleh itu, diagnosis pada peringkat awal penyakit adalah sangat penting, dan ini dapat dicapai dengan peperiksaan biasa dan komprehensif.

Dalam artikel ini, kita akan melihat pelbagai kaedah untuk mendiagnosis penyakit paru-paru ini, dan juga cuba menentukan ujian darah untuk batuk kering pulmonari yang paling dipercayai dan bermaklumat.

Apabila perlu untuk memeriksa batuk kering

Oleh itu, pemeriksaan adalah perlu untuk:

  • hubungan dengan pembawa penyakit;
  • kelemahan umum;
  • berat badan;
  • peningkatan suhu pada petang;
  • batuk kronik.

Sangat penting untuk menentukan masa kehadiran tuberkulosis pada zaman kanak-kanak, kerana kemungkinan besar terdapat pada anak-anak bahawa jangkitan akan menyebabkan proses patologi lebih lanjut dalam tubuh.

Ia penting! Salah satu langkah pencegahan ialah vaksin BCG pada hari ke-4 kehidupan kanak-kanak dan pada usia 7 tahun. Tubuh kanak-kanak itu lebih lemah daripada orang dewasa, jadi penting untuk melindunginya dari jangkitan dan meletakkan vaksinasi.

Penyelidikan untuk disyaki batuk kering

Tuberkulosis dapat dikesan dalam beberapa cara.


Foto 1. Fragment X-ray dada pesakit dengan tuberkulosis. Fluorografi adalah salah satu cara yang paling boleh dipercayai untuk mendiagnosis penyakit ini, tetapi paling berkesan dalam kombinasi dengan orang lain. Sebagai contoh, ujian darah terperinci akan menunjukkan tuberkulosis walaupun pada peringkat awal.

  1. Pemeriksaan sinar-X. Fluorografi akan membantu menilai tahap kerosakan paru-paru. Walau bagaimanapun, perlu diingat bahawa imej X-ray tidak akan menunjukkan peringkat awal penyakit. Penyiasatan ini harus komprehensif. Untuk peperiksaan yang lebih lengkap, paru-paru pesakit harus diambil gambar dari depan dan dari belakang.
  2. Ujian Tuberculin. Semasa memeriksa kanak-kanak, ujian tuberkulin paling kerap digunakan (ujian Mantoux). Tuberculin adalah campuran protein yang diasingkan daripada patogen yang mati. Pengenalan dadah di bawah kulit menyebabkan reaksi imuniti, yang menunjukkan dirinya dengan cara yang berbeza. Jika tiada patogen dalam badan, maka selepas beberapa hari suntikan akan meninggalkan tanda yang tidak dapat dilihat. Dengan keradangan tapak suntikan atau pembentukan abses, kebarangkalian jangkitan pesakit adalah tinggi.

Ia penting! Ujian Mantoux tidak membenarkan untuk menentukan kehadiran tuberkulosis dengan kebarangkalian 100%, bagaimanapun, ia akan membantu menentukan kumpulan risiko penyakit ini. Dengan ujian penjagaan perlu dilakukan kepada mereka yang mengalami alahan. Tubuh dapat bertindak balas terhadap pengenalan komposisi dengan cara yang tidak dapat diprediksi.

  1. Ujian darah Hasilnya membantu mengesan jejak patogen. Dilantik untuk mengenal pasti diagnosis akhir dan tahap penyakit.
  2. Komposisi mulut. Kehadiran mycobacterium tuberculosis memungkinkan untuk mengenal pasti dan mengkaji sputum. Bahan ini dijumpai melebihi norma penunjuk protein, yang membedakannya dari dada bronkial, serta agen berjangkit.

Adakah mungkin menentukan batuk kering melalui ujian darah umum?

Komposisi sel darah merah (sel-sel merah) di hadapan bakteria bervariasi sedikit. Peredaran usus akut atau paru-paru membangkitkan anemia, penurunan yang ketara dalam hemoglobin.

Ada orang yang ragu-ragu sama ada ia mungkin menentukan tuberkulosis dengan ujian darah. Malah, analisis umum dapat mengenalpasti proses radang dan patologi yang berkembang di dalam tubuh mengikut peningkatan penunjuk ESR. Kadar peningkatan menunjukkan bukan sahaja aktiviti dan tempoh keradangan semasa, tetapi juga membesar-besarkan kronik, terutamanya dalam peringkat akhir penyakit.


Foto 2. Doktor melakukan prosedur untuk mengumpul darah dari urat pesakit dengan jarum suntikan. Selepas itu, ujian darah akan dijalankan, dengan batuk kering, penunjuk yang akan menunjukkan proses keradangan.

Ia penting! Tahap ESR boleh dikelirukan dengan petunjuk untuk keradangan atau kanser paru-paru. Dalam kes ini, adalah perlu untuk menyiasat bilangan eosinofil (salah satu jenis sel darah putih). Jika eosinophils diperbesar, dan formula leukosit menunjukkan perubahan dramatik dalam ujian darah, ini berlaku dengan tuberkulosis, dan dikecualikan dengan radang paru-paru.

Adakah ujian darah klinikal dan biokimia tepat?

Ujian darah untuk batuk kering paru sering tidak mencukupi untuk mendiagnosis bacillus tubercle. Kemudian peperiksaan lanjut diperlukan. Perkara yang sama boleh dikatakan mengenai analisis biokimia darah. Sekiranya peringkat awal tuberkulosis atau bentuk laten, kemungkinan besar tidak akan menunjukkan sebarang kelainan. Dan hanya dalam bentuk penyakit akut, pekali albumin-globulin di dalamnya akan diturunkan.

Jenis ujian darah untuk antibodi ke tuberkulosis

Terdapat lebih tepat, mendalam daripada OAK, kaedah ujian darah, yang membolehkan mengesan tuberkulosis. Bagaimana untuk menentukan dari ujian darah sedemikian, jika anda mempunyai penyakit, pertimbangkan seterusnya.

Mewujudkan diagnosis objektif adalah mungkin dengan menggunakan pendekatan reaksi rantai polimerase (PCR) dan assay imunosorben berkaitan enzim (ELISA).

Adakah kaedah ELISA menunjukkan kehadiran tuberkulosis

Dengan bantuan ELISA, kehadiran antibodi patogen dalam pesakit dikesan. Kaedah ini mudah kerana ia membolehkan anda untuk meneliti sejumlah besar sampel secara serentak. Walau bagaimanapun, ia mempunyai kepekaan yang rendah dan disyorkan untuk digunakan di kawasan dengan kadar insiden yang rendah.

Apakah perubahan kaedah PCR?

Kaedah PCR adalah antara yang paling berkesan. Ia digunakan untuk mengenal pasti penyakit ini, menentukan keparahan dan remisi semasa rawatan dengan mencari DNA mikrobakteria.

PCR digunakan untuk:

  • pengesanan tongkat progresif Koch;
  • ujian untuk mengesan tuberkulosis ekstrapulmonari;
  • penubuhan pesat untuk penyetempatan jangkitan;
  • diagnosis penyakit berulang;
  • memantau perjalanan rawatan.

Kedua-dua dia dan ujian darah lain untuk antibodi kepada tuberkulosis dianggap agak boleh dipercayai. Tetapi ada yang lain.

Kaedah ujian darah alternatif

Pelepasan Gamma Interferon Assays kurang biasa daripada PCR dan ELISA untuk mengesan mikroba bakteria patogenik. Ia boleh dijalankan berbanding ujian taberculin. Reaksi menunjukkan pembentukan gamma interferon sebagai tindak balas kepada pengenalan mikrobakteria. Hasilnya secara tepat dapat menentukan kehadiran jangkitan.

Kaedah penyelidikan alternatif lain ialah QuantiFERON-TB Gold. Kaedah ini paling sering digunakan untuk menguji kanak-kanak yang mempunyai reaksi alergi yang kuat terhadap ujian tuberculin.

Ia penting! Kedua-dua kaedah tidak membenarkan menentukan tahap jangkitan - aktif atau laten.

Doktor yang menghadiri menentukan jenis ujian darah yang akan digunakan. Selalunya, kajian ini dijalankan dalam kompleks. Ujian darah untuk tuberkulosis laten mungkin tidak memberi hasil sama sekali.

Bagaimana penunjuk ujian darah

Apabila mentafsirkan ujian darah am, perhatian harus dibayar kepada tahap ESR, hemoglobin, leukosit.

Tahap ESR dalam orang yang sihat akan kurang daripada 50 unit, lebihan penunjuk ini menunjukkan proses keradangan di dalam badan.

Bilangan leukosit dalam darah pesakit dengan tuberkulosis mencapai 6 hingga 10 9 / l, dalam kes-kes yang teruk dan teruk dalam perkembangan penyakit - 12-15 hingga 10 9 / l.

Komposisi sel darah merah pada kebanyakan pesakit tetap normal. Hemoglobin rendah direkodkan dalam tuberkulosis miliary, pneumonia caseous.

Bentuk akut, progresif dan rumit penyakit ini mengubah leukogram. Dalam beberapa kes, leukositosis sederhana dikesan (sehingga 10,000-15,000 leukosit), kurang leukopenia.

Apa sahaja yang anda lakukan ujian darah untuk tuberkulosis pulmonari, menguraikannya adalah kerja profesional berpengalaman. Hanya mereka boleh menentukan dengan tepat bagaimana tuberkulosis berjalan, jika ia masih dikesan. Analisis ELISA dan PCR dinyahkodkan sama. Dalam bentuk khas, hasil negatif atau positif ditunjukkan bertentangan dengan jangkitan yang ditetapkan.

Jenis ujian untuk rawatan

Kesukaran rawatan terletak pada hakikat bahawa jangkitan itu boleh menjadi tahan terhadap apa-apa jenis antibiotik, terutamanya dalam peringkat lanjut, serta tempoh inkubasi yang panjang di mana ia tidak mungkin untuk menentukan jangkitan.

Selepas mengenal pasti dan menetapkan terapi yang sesuai, proses penyembuhan dipantau pada selang 1-2 kali sebulan. Pesakit memberikan darah dan kahak.


Foto 3. Jadual perubatan di pejabat doktor selepas pesakit pesakit dikumpulkan. Contoh-contoh sputum disertakan dalam tiub plastik dan menunggu ujian makmal.

Anda boleh mengambil kiraan darah lengkap, ujian Mantoux, dan anda boleh menjalani fluorografi di hampir mana-mana pusat perubatan, ini dilakukan dengan segera jika timbul kecurigaan. Berdasarkan data yang diperoleh, ahli terapi akan membuat kesimpulan mengenai ketiadaan perubahan patologi dalam badan atau akan mengeluarkan rujukan untuk pemeriksaan lanjut dalam pembedahan tubi.

Kajian yang khusus dan lebih tepat dilakukan di TB dispensaries, yang dilengkapi dengan makmal dan reagen yang diperlukan untuk penyelidikan.

Jadi, merumuskan di atas:

  • Tuberkulosis adalah penyakit berbahaya yang sangat penting untuk mengesannya dalam masa yang singkat;
  • peningkatan ESR, kegelapan dalam paru-paru, perubahan dalam leukogram memberikan asas untuk menghantar pesakit untuk pemeriksaan lanjut untuk mengesan jangkitan;
  • rawatan dijalankan dengan bantuan ubat anti-TB; Fasa rawatan intensif berterusan sehingga penunjuk klinikal dan radiologi positif diperolehi.

Video berguna

Kami menawarkan untuk menonton video, yang juga menjawab soalan sama ada ia mungkin untuk mengesan tuberkulosis dengan ujian darah. Ia menerangkan dengan lebih terperinci mengenai ujian kuantiferone TB QuantiFERON TB, yang menunjukkan dalam analisis tuberkulosis darah oleh tindak balas imun.

Menentukan jumlah darah lengkap untuk tuberkulosis pada orang dewasa dan kanak-kanak

Jangkitan dengan bacillus tubercle tidak lagi menjadi hukuman bagi seseorang. Perubatan moden menggunakan alat yang berkesan untuk memerangi penyakit ini, jika ia dikesan pada peringkat awal. Peperiksaan dan ujian pencegahan yang kerap, termasuk ujian darah umum untuk tuberkulosis, membantu mengesan patologi pada masa tersebut.

Perubahan dalam gambar klinikal

Kiraan darah lengkap untuk batuk kering pulmonari (UAC) tidak mempunyai manifestasi tertentu. Tiada penanda bercakap mengenai perkembangan tuberkulosis, dan menentukan tahap penyakit. Tetapi oleh tanda-tanda yang tidak spesifik seseorang boleh menghakimi proses penderaan laten dan mengesyaki perubahan dalam paru-paru.

Penyelarasan sel darah merah dari norma

Dengan bentuk lembap atau lesi setempat, bilangan eritrosit dalam darah tidak berubah, tetapi warna mereka berubah. Tahap hemoglobin dalam eritrosit dikurangkan. Keadaan ini dipanggil hypochromia.

Dengan lesi infiltratif yang signifikan dalam tisu paru-paru, ujian darah klinikal menunjukkan pengurangan jumlah sel darah merah, penurunan saiznya. Sel tidak matang muncul - reticulocytes, yang merupakan "prekursor" sel darah merah. Pada peringkat awal tuberkulosis, bilangan reticulocytes tidak melebihi 0.5%.

Anemia yang teruk adalah lebih biasa pada orang dewasa dengan batuk kering maju. Pada masa yang sama, jumlah reticulocytes meningkat kepada 1% daripada jumlah sel darah merah.

Shift Leukocyte

Leukosit sebagai sel-sel sistem imun digunakan sebagai tindak balas kepada penyakit di tempat pertama. Menurut ujian darah umum dan kajian leukogram, kedua-dua kehadiran proses keradangan dan peringkatnya ditentukan.

Dengan bentuk tertutup yang tidak rumit, terdapat peningkatan yang ketara dalam bilangan neutrofil - sel darah putih yang bertanggungjawab untuk melawan jangkitan bakteria. Promyelocytes muncul - sel leukosit tidak matang, yang biasanya tidak berlaku.

Long, mengalir keras, tuberkulosis pulmonari disertai dengan perubahan degeneratif dalam neutrofil, pembentukan bawaan patologi. Bilangan eosinofil berkurangan dengan ketara. Terdapat limfopenia - pengurangan bilangan limfosit. Semua tanda-tanda ini menunjukkan proses keradangan yang berpanjangan, disertai oleh pembentukan pus dan massa nekrotik.

Perubahan ESR

Penentuan tuberkulosis dalam fasa aktif membantu ESR - penunjuk kadar sedimentasi eritrosit. Pengumpulan immunoglobulin, fibrinogen, menyumbang kepada pemendakan sel-sel merah dan curah hujan yang cepat. Biasanya, parameter darah pada lelaki tidak lebih tinggi daripada 10 mm / h, pada wanita - 15 mm / h. Pecutan ESR sehingga 80mm / h menunjukkan pengaktifan proses keradangan di dalam badan.

Ciri penunjuk pada kanak-kanak

Ujian darah untuk tuberkulosis dalam kanak-kanak tidak jauh berbeza dengan perubahan dewasa. Pengekodan hasilnya dilakukan pada penunjuk yang sama:

  • Pada fasa awal penyakit, rumit erythrocyte berubah sedikit. Anemia hanya boleh berlaku dalam bentuk yang merosakkan. Dalam kes lain, bilangan sel darah merah kekal tidak berubah, sementara peratusan erythrocyte belum matang meningkat. Tuberkulosis pada kanak-kanak boleh disyaki apabila reticulocytes dikesan melebihi 1 ppm.
  • Penunjuk leukosit juga mengalami perubahan. Leukositosis berkembang - peningkatan jumlah sel darah putih akibat neutrofil, dan bilangan limfosit berkurangan dengan ketara. Pada norma untuk kanak-kanak berusia lebih 6 tahun 40%, bilangan limfosit dalam tuberkulosis tidak lebih daripada 20%.

Pada peringkat awal penyakit, jumlah eosinophils tumbuh - sel-sel yang bertindak balas terhadap tindak balas alergi. Penurunan mendadak di dalamnya menunjukkan bahawa proses memasuki fasa aktif.

  • Pada kanak-kanak, ESR tidak melebihi 10mm / h. Pecutan kepada 50mm / h menunjukkan penggerak pertahanan tubuh untuk melawan proses keradangan.

Pada kanak-kanak, peringkat awal penyakit sering berlaku tanpa gejala jelas atau bertopeng oleh ARVI.

Perubahan bergantung pada tahap penyakit

Bolehkah dengan pasti menubuhkan kehadiran tumpuan tuberculosis dengan bantuan ujian darah makmal? Malangnya tidak. Jumlah darah lengkap untuk tuberkulosis dapat mengesan proses keradangan hanya pada peringkat tertentu penyakit.

  1. Dalam peringkat penyusupan, leukosit bertindak balas sedikit, dan ESR meningkat.
  2. Di peringkat perpecahan, terdapat perubahan dalam formula leukosit dan eritrosit.
  3. Borang penyebaran semasa analisis akan memberikan lebih banyak penyataan yang dinyatakan di atas.
  4. Apabila proses keradangan merosot atau proses pemulihan, darah merah kembali normal, jumlah dan nisbah leukosit dipulihkan.
  5. Bentuk tuberkulosis pulmonari yang tidak aktif tidak dikesan oleh pemeriksaan darah am.

Pengesanan awal tuberkulosis adalah prasyarat untuk rawatan yang berjaya, dan kiraan darah lengkap adalah satu kaedah yang membolehkan mengesan proses radang laten dalam masa. Dan walaupun analisis itu tidak dianggap sebagai kaedah penyelidikan khusus, mungkin untuk menutupi jisim besar orang dalam waktu yang singkat. Dalam kes pengesanan keabnormalan dalam gambaran klinikal ciri, analisis spesifik batuk kering dan fluorografi ditetapkan.

Siapa yang mengatakan bahawa mustahil untuk mengubati tuberkulosis?

Anda telah didiagnosis dengan tuberkulosis. Anda memenuhi semua preskripsi doktor, tetapi tidak ada pemulihan. Sebilangan pil yang menyakitkan perut, mengejar kelemahan dan sikap tidak peduli? Mungkin anda perlu mengubah pendekatan untuk rawatan.

Doktor tidak dapat mengatasi punca penyakit anda. Baca kisah Helen, yang berjaya mengalahkan tuberkulosis tidak kira apa. Baca artikel >>

Petunjuk ESR dalam tuberkulosis

Kini, mengikut statistik, tuberkulosis adalah penyakit yang paling biasa di kalangan orang ramai. Selalunya, penyakit ini memberi kesan kepada kanak-kanak dan golongan miskin. Perlu diperhatikan bahawa setiap tahun peratusan orang sakit berlipat ganda. Dalam hubungan ini, ubat dan kaedah baru sedang dibangunkan untuk rawatan batuk kering.

Faktor utama yang menyumbang kepada perkembangan tuberkulosis ialah penurunan imuniti, yang boleh disebabkan oleh pencemaran alam sekitar. Adalah mungkin untuk mendiagnosis penyakit ini dengan bantuan ujian dan dalam banyak cara lain.

Ujian darah untuk tuberkulosis adalah penunjuk utama untuk menentukan penyakit pada manusia. Tuberkulosis adalah penyakit berjangkit berbahaya. Perlu diingat bahawa dalam tahap yang lebih maju penyakit ini sangat sukar untuk dirawat, jadi sangat penting untuk melihat penyakit itu dalam masa dan memulakan rawatan yang tepat di hospital.

Cara mengatasi batuk kering

Penyakit ini mempunyai mekanisme penghantaran udara. Oleh itu, jangkitan boleh berlaku akibat kemasukan patogen ke dalam badan melalui membran mukus. Di samping itu, tuberkulosis boleh disebarkan dari seorang ibu yang sakit kepada janin yang sedang berkembang.

Dalam kebanyakan kes, tuberkulosis menjejaskan sistem pernafasan. Pisahkan bentuk extrapulmonary penyakit (mempengaruhi sistem pencernaan, sistem saraf pusat, mengganggu fungsi visual, sendi, sistem urogenital).

Sumber utama penyakit ini adalah mycobacterium - tongkat Koch. Ia memberi kesan kepada paru-paru, kulit, tulang dan banyak organ lain. Biasanya, tuberkulosis boleh menyebabkan kecacatan atau kematian. Walau bagaimanapun, jika penyakit ini didiagnosis seawal mungkin, maka ia boleh dirawat dengan baik.

Petunjuk ESR dalam tuberkulosis

Ujian darah untuk penentuan tuberkulosis menunjukkan kursus klinikal proses keradangan. Biasanya, kadar pemendapan erythrocyte adalah: pada lelaki, 1-10 mm / j, pada wanita, 2-15 mm / h.

Patogen, memasuki tubuh manusia, menyebabkan kerosakan pada tisu dan organ-organ dari pelbagai sistem. Termasuk perubahan dalam tuduhan darah. Maka apabila dijangkiti dengan tongkat, terdapat peningkatan yang sangat kuat dalam kadar sedimentasi eritrosit. Jumlah leukosit juga meningkat, kerana tubuh mempunyai proses radang.
Sebagai peraturan, tuberkulosis tidak menyebabkan perubahan ketara dalam sel darah merah. Perkembangan anemia kecil dan hemoglobin yang rendah hanya dapat dikembangkan dengan kehilangan darah yang signifikan. Oleh itu, tuberkulosis disertai oleh lebihan ESR yang jauh lebih tinggi daripada nilai normal.

Gejala

Gejala utama tuberkulosis termasuklah:

  1. Demam;
  2. Berpeluh malam;
  3. Kemunculan sesak nafas;
  4. Batuk kering dan kuat dengan dahak (garis darah boleh hadir);
  5. Keletihan umum;
  6. Kehilangan berat dramatik;
  7. Keletihan pantas;
  8. Lethargy;
  9. Aggressiveness;
  10. Kurang selera makan;
  11. Sakit dada.

Kanak-kanak, berbeza dengan orang dewasa, paling mudah terdedah kepada tuberkulosis. Oleh itu, adalah perlu untuk memeriksa anak anda secara teratur dan menjalankan ujian untuk mengenal pasti tongkat Koch. Diagnosis tepat pada masanya membolehkan anda mencapai keputusan positif tanpa akibat yang serius.

Sesetengah orang mempunyai sistem imun yang kuat. Dalam kes ini, gejala-gejala penyakit mula muncul hanya pada peringkat kemudian. Apabila imuniti lemah, gejala muncul pada awal penyakit ini.
Tuberculosis berkembang dengan perlahan dan secara beransur-ansur:

  • Borang utama.
    Membangunkan selepas jangkitan. Gejala utama pada peringkat ini adalah bengkak getah bening.
  • Laten (bentuk laten).
    Permulaan penyakit ini dicirikan oleh ketiadaan gejala. Tambahan pula, mereka muncul dalam bentuk kesakitan tertentu semasa bernafas dan batuk, kekurangan selera makan, peningkatan berpeluh, dan keletihan yang cepat. Borang ini boleh dianggap tidak berjangkit.
  • Borang terbuka.
    Bentuk penyakit yang paling serius. Untuk rawatan, adalah perlu untuk melindungi orang sakit dari orang lain di institusi perubatan tertutup. Ini adalah untuk memastikan keselamatan orang-orang di sekeliling mereka.
  • Bentuk sekunder.
    Diamati sebagai hasil jangkitan semula.

Diagnosis tuberkulosis

Pengesanan penyakit ini adalah rumit oleh persamaan gejala pertama dengan bronkitis kronik. Peranan utama dalam diagnosis tuberkulosis adalah pengambilan ujian yang tepat pada masanya dari calon pesakit. Oleh itu, jika pesakit disyaki mempunyai tuberkulosis, kajian sputum dijalankan. Untuk melakukan ini, dahak dikumpulkan pada siang hari dan dihantar ke makmal untuk mengesan mycobacteria.

Perlu diingat bahawa diagnosis tuberkulosis mempunyai kaedah lain untuk memeriksa pesakit.

Cara yang paling berkesan untuk mendiagnosis penyakit adalah:

  1. B / x ujian darah;
  2. Analisis air kencing;
  3. Analisis sputum;
  4. Ujian Mantoux, Pirque;
  5. CT (computed tomography);
  6. Ujian darah serologi (ELISA, PCR);
  7. Bronkoskopi;
  8. Biopsi;
  9. Tusukan pleural;
  10. Fluorografi;
  11. Roentgenoscopy.

Perlu diingat bahawa tuberkulosis disertai dengan peningkatan kepekatan kolesterol, lysozyme, asid urik dan Cu dalam serum darah. Berdasarkan ini, semua perubahan dalam tuberkulosis boleh menjadi sangat spesifik.

Setiap bentuk penyakit berbeza, keterukan, diagnosis dan rawatan. Oleh itu, apabila gejala pertama muncul, anda perlu segera berjumpa dengan doktor dan jangan mengubat sendiri. Kerana anda hanya boleh memperburuk keadaan dan memburukkan keadaan anda.

Pada masa ini, terdapat banyak ubat yang berkesan melawan agen penyebab tuberkulosis. Peranan utama dalam pemulihan seseorang dimainkan oleh diagnosis tepat pada masanya dan terapi yang kompeten. Juga, keadaan umum pesakit bergantung kepada proses pemulihan selepas penyakit. Oleh itu, jika anda mematuhi semua cadangan perubatan, anda boleh mengurangkan risiko jangkitan semula.

Diagnosis makmal tuberkulosis

Tuberkulosis adalah penyakit yang mudah didiagnosis dalam keadaan semasa dan pencapaian saintifik. Diagnosis makmal tuberkulosis adalah pusat kepada kaedah diagnostik lain, kedua hanya untuk kaedah x-ray.

CBC

Pada pesakit dengan batuk kering, perubahan dalam ujian darah am tidak patognomonik. Dengan bentuk tuberkulosis yang terhad dan tidak aktif, hipokromia eritrosit adalah tipikal untuk bilangan normal mereka. Dengan infiltrat besar atau radang paru-paru, dengan limfadenitis kes yang meluas, lesi khusus usus, serta pendarahan pulmonari atau postoperative besar, erythropenia dan microcytosis, oligochromasia, polchromasia dicatatkan. Macrocytosis, dan lebih-lebih lagi poikilositosis adalah kurang biasa, biasanya dengan anemia teruk. Bilangan reticulocytes dengan tahap tuberkulosis yang beransur-ansur berbeza dari 0.1 hingga 0.6%, dengan subcompensated - dari 0.6 hingga 1.0%, dan 1% daripada reticulocytes adalah ciri decompensated.

Dalam kes-kes tuberkulosis, leukositosis sederhana (sehingga 15 ribu leukosit) boleh dilihat dalam beberapa kes, kurang leukopenia, yang dijumpai dalam 2-7% kes pada pesakit dengan bentuk proses yang terhad dan mudah dan 12.5% ​​dalam tuberkulosis pulmonari yang merosot dan progresif.

Selalunya beralih berlaku dalam formula leukosit. Kedua-dua neutrophilia relatif dan mutlak, peredaran leukosit sederhana ke kiri ke promelelosit dinyatakan. Myelocytes jarang ditemui dalam kes batuk kering yang tidak rumit. Peningkatan bilangan neutrofil dengan granulariti patologi dalam hemogram pesakit dengan batuk kering selalu menunjukkan tempoh proses: pada pesakit yang mengalami tuberkulosis yang teruk, hampir semua neutrofil mengandungi butiran patologi. Apabila wabak suntikan berkurangan, perubahan nuklear menjadi normal dengan cepat. Neutrophils biasanya tidak lebih lama daripada perubahan lain dalam hemogram.

Kandungan eosinofil dalam darah periferal juga berbeza-beza bergantung kepada fasa proses dan keadaan alahan badan. Jumlah mereka berkurangan kepada aneosinofilia semasa wabak penyakit yang teruk dan berkepanjangan dan, sebaliknya, meningkat dengan resorpsi infiltrat dan efusi pleura, serta dengan bentuk awal tuberkulosis utama.

Kebanyakan bentuk tuberkulosis utama disertai oleh limfopenia, yang kadang-kadang diperhatikan untuk beberapa tahun walaupun selepas perubahan parut tertentu. Tuberkulosis sekunder dalam fasa akut, bergantung kepada keparahan proses, boleh disertai sama ada bilangan limfosit normal atau limfopenia.

Di antara ujian untuk menilai proses tabung, satu tempat khas diduduki oleh penentuan kadar sedimentasi erythrocyte (ESR), yang penting dalam menilai perjalanan proses tuberkulosis dan mengenal pasti bentuk aktifnya. Peningkatan ESR menunjukkan kehadiran proses patologi (infeksi-radang, purulen, septik, hemoblastosis, penyakit Hodgkin, dan lain-lain) dan berfungsi sebagai penunjuk keparahannya, bagaimanapun, penunjuk ESR biasa tidak selalu menunjukkan ketiadaan patologi. Pemendapan rythrocyte dipercepat oleh peningkatan kandungan globulin dalam darah, fibrinogen, kolesterol, dan pengurangan kelikatan darah. Pengurangan pendinginan erythrocyte adalah ciri-ciri yang melibatkan hemoconcentration, peningkatan dalam kandungan albumin dan asid hempedu.

Hemogram pada pesakit yang mengalami perubahan tuberkulosis semasa rawatan. Perubahan hematologi hilang lebih cepat, intervensi terapeutik yang lebih berjaya. Walau bagaimanapun, perlu diingat kesannya terhadap hematopoiesis pelbagai ubat antibakteria. Mereka sering menyebabkan eosinofilia, dalam beberapa kes - leukositosis, dan lebih sering leukopenia sehingga agranulocytosis dan reaksi limfoid-retikular. Kawalan hematologi sistematik dan analisis data yang betul adalah penting untuk menilai keadaan klinikal pesakit, dinamik proses dan keberkesanan rawatan yang digunakan.

Urinalisis

Dengan sistem tuberkulosis kencing, ujian air kencing adalah kaedah diagnostik makmal utama. Anda boleh melihat leukocyturia, erythrocyturia, proteinuria, hipoisostenuria, mycobacterium tuberculosis, bakteriuria tidak spesifik.

Leukocyturia adalah gejala yang paling biasa dari batuk kering sistem kencing sebelum kemoterapi tertentu dan tidak hadir hanya dalam kes-kes yang luar biasa, contohnya, dengan penghapusan lengkap lumen ureter. Ujian Nechiporenko (penentuan bilangan leukosit dalam 1 ml air kencing) membantu untuk lebih menilai tahap leukocyturia dalam nefrotuberculosis, dan dalam beberapa kes untuk mengenal pasti dalam urinalysis biasa. Walau bagaimanapun, perlu diingat bahawa leukocytouria boleh berada di pyelonephritis akut dan kronik, sistitis, uretritis, batu di buah pinggang dan ureter.

Erythrocyturia. seperti leukocyturia. Ia dianggap sebagai salah satu tanda makmal yang paling kerap dalam tuberkulosis sistem genitouriner. Kekerapan hematuria bergantung kepada kelaziman proses, ia meningkat dengan perkembangan proses suntikan yang merusak di buah pinggang. Erythrocyturia tanpa leukocyturia lebih banyak ciri pada peringkat awal batuk kering ginjal. Hematuria, yang lazim di leukocyturia, adalah hujah penting yang memihak kepada tuberkulosis buah pinggang dalam pembezaannya dengan pyelonephritis yang tidak spesifik.

Ujian darah biokimia

Dalam tuberkulosis, perubahan dalam beberapa parameter biokimia bergantung terutamanya pada fasa proses, komplikasi dan pelbagai penyakit bersamaan. Pada pesakit dengan batuk kering yang tidak aktif dan organ-organ lain, jumlah protein dan protein serum darah tidak berubah dan menentukan kandungan normalnya.

Dalam bentuk penyakit akut, serta dalam peningkatan dan perkembangan bentuk tuberkulosis kronik, koefisien albumin-globulin berkurang.

Penting dalam menilai keadaan fungsional dan kerosakan organik ke hati dalam tuberkulosis dan komplikasinya adalah penentuan dalam serum bilirubin langsung dan total, aspartat aminotransferase (ACT), alanine aminotransferase (ALT). Penentuan dinamik tahap aminotransferases. bilirubin dalam rawatan pesakit dengan batuk kering, terutamanya dalam bentuk yang teruk, adalah komponen mandatori pemeriksaan biokimia pesakit dengan batuk kering dan dijalankan setiap bulan.

Penilaian keadaan berfungsi buah pinggang termasuk penentuan kreatinin serum dan pengiraan kadar penapisan glomerular menggunakan formula Cockroft-Gault. Pengiraan kadar penapisan glomerular menggunakan ujian Reberg memberikan keputusan yang kurang tepat.

Matlamat utama kajian biokimia yang dinamik bagi pesakit dengan tuberkulosis adalah untuk mengawal perjalanan proses, mengenal pasti kesan sampingan ubat-ubatan dan pembetulan yang mencukupi terhadap gangguan yang timbul dari homeostasis.

Penggunaan kaedah penyelidikan biokimia untuk batuk kering ekstrapulmonari

Penunjuk yang paling bermaklumat mempertimbangkan kandungan asid tuberkulostearic dalam cecair biologi, tetapi definisinya penuh dengan masalah teknikal (keperluan menggunakan kromatografi gas dan spektrometri massa).

Ia menjanjikan untuk mengukur aktiviti adenosin deaminase, enzim yang dikesan dalam cecair: sinovial, pericardial, ascitic, atau cerebrospinal. Pengeluar utama adenosine deaminase adalah limfosit dan monosit. Penentuan aktiviti adenosin deaminase dalam cairan biologi memudahkan diagnosis sinovitis tabrakan, tuberkulosis nodus limfa, meningitis tuberkulosis, serositis tuberkulosis.

Sesetengah parameter biokimia disebabkan oleh ketidakpastian mereka hanya ditentukan dalam cecair biologi berhampiran dengan lesi. Tahap penunjuk diukur sebagai tindak balas kepada subkutaneus atau intracutaneous tuberkulin (biasanya sebelum pentadbiran dan 48 dan 72 jam selepas itu). Selepas itu, tahap peningkatan tahap penanda (dalam%) berhubung dengan peringkat awal dikira.

Penentuan optimum dalam air kencing aktiviti enzim tertentu organ transamidinase, kejadiannya yang dicatatkan dengan kerosakan ginjal dari pelbagai alam. Kajian tentang transaminidase hanya dibenarkan dalam keadaan pentadbiran tuberkulin subkutaneus untuk memburukkan lagi proses peradangan tempatan. Aktiviti transamidinase dalam air kencing ditentukan pada garis dasar dan 24-72 jam selepas pentadbiran 50 TE tuberculin. Peningkatan fermenturia sebanyak 2 kali dan lebih membolehkan 82% kes membezakan batuk kering yang aktif dari buah pinggang akibat pembengkakan pyelonephritis kronik.

Dalam tuberkulosis alat kelamin wanita, kepekatan haptoglobin dan malondialdehida dalam darah ditentukan dalam ujian tuberkulin provokatif. Tuberculin diberikan subcutaneously pada dos 50 TE dan, selepas 72 jam, kajian biokimia yang berulang dilakukan. Dalam kes etiologi tisu, tahap peningkatan dalam haptoglobin adalah sekurang-kurangnya 28%, dan tahap malondialdehid - 39% atau lebih. Juga digunakan untuk menentukan aktiviti adenosin deaminase dalam cecair peritoneal yang diperolehi dari ruang Douglas. Tebal ini diperiksa semula 72 jam selepas pentadbiran dalam tuberkulin dalam dos 0.1 TE dan 0.01 TE di kawasan unjuran organ-organ genital dalaman pada dinding perut anterior. Memihak kepada proses tabung, peningkatan dalam aktiviti adenosine deaminase sebanyak 10% atau lebih berbanding dengan yang awal menunjukkan.

Dengan kerosakan mata, tindak balas fokus yang berlaku di mata sebagai tindak balas terhadap rangsangan antigen diperiksa. Pada masa yang sama pembangunan yang tidak diingini tindak balas yang jelas, disertai oleh penurunan dalam fungsi visual. Oleh kerana penilaian tindak balas fokal yang minima seringkali sukar, untuk membantah kesimpulan, disyorkan untuk memberi tumpuan secara selari pada tahap peningkatan haptoglobin serum atau adenosin deaminase.

Semua kajian biokimia perlu dilakukan bersamaan dengan kaedah lain.

Ujian Pembekuan Darah

Kaitannya dengan kajian keadaan sistem pembekuan darah dalam fisiologi adalah disebabkan adanya pendarahan atau pendarahan paru-paru dalam sejumlah pasien dengan tuberkulosis, serta komplikasi hemokoagulasi dalam pembedahan tuberkulosis. Di samping itu, hemocoagulation intravaskular laten, yang secara semula jadi bersamaan dengan tuberkulosis, mempengaruhi perjalanan penyakit dan keberkesanan kemoterapi.

Pada pesakit dengan tuberkulosis pulmonari dengan dominasi komponen eksudatif keradangan, penurunan aktiviti antikoagulan darah diperhatikan. Pada pesakit yang mempunyai prevalensi rendah lesi tertentu di paru-paru dengan dominasi komponen keradangan yang produktif, hemocoagulation intravaskular tidak begitu ketara. Pada pesakit dengan tuberkulosis pulmonari dengan hemoptysis dan pendarahan pulmonari, keadaan sistem pembekuan darah adalah berbeza: pada pesakit dengan kehilangan darah sedikit pada ketinggian hemoptoe atau segera selepas penamatannya, peningkatan mendadak dalam pembekuan darah diperhatikan kerana peningkatan proses pembentukan trombin ditandai sambil mengekalkan peningkatan "struktur" pembekuan. Pada pesakit dengan kehilangan darah yang besar, penurunan potensi koagulasi diperhatikan kerana penurunan kepekatan fibrinogen. aktiviti faktor XIII, kiraan platelet. Pada peringkat rawatan pembedahan pada pesakit dengan bentuk tuberkulosis pulmonari yang terhad, tidak terdapat gangguan yang signifikan dengan sistem homeostasis. Pesakit dengan proses biasa semasa melakukan pneumonim atau pleuropneumonectomy sering membina DIC, yang mungkin mengambil bentuk "penyakit kedua".

Untuk memantau keadaan sistem pembekuan darah pada pesakit dengan tuberkulosis pulmonari, perlu menentukan masa tromboplastin parsial yang aktif (APTT), fibrinogen, masa trombin, indeks prothrombin, serta masa pendarahan dan masa pembekuan darah.

Kajian hormon

Pemerhatian eksperimen dan klinikal moden menunjukkan kehadiran perubahan dalam status hormon pneumonia pulmonari tertentu. Dibuktikan bahawa pembetulan disfungsi sistem pituitari-adrenal, pituitari-tiroid dan fungsi pankreas bersamaan dengan terapi anti-tuberkulosis menyumbang kepada pengaktifan proses fibrogenesis dan pembaikan dalam fokus keradangan tertentu.

Status fungsian sistem pituitari-tiroid diadili oleh kandungan dalam serum triiodothyronine (T3), tiroksin (T4), tiroid hormon pituitari (TSH). Telah ditubuhkan bahawa hipotiroidisme subklinikal dikesan dalam 38-45% pesakit dengan batuk kering paru-paru, dan ia paling kerap didiagnosis dalam bentuk-bentuk penyebaran dan berserabut yang berserabut. Di bawah bentuk yang sama, tahap seperti T paling berkurangan.3,jadi dan t4, dan terdapat ketidakseimbangan hormon ini dalam bentuk meningkatkan nisbah T4/ Ts.

Fungsi korteks adrenal dinilai oleh tahap kortisol dalam serum darah, dan fungsi endokrin pankreas oleh kepekatan insulin-reaktif insulin. Dalam fasa akut penyakit berjangkit, keperluan kortisol endogen dan insulin meningkat. Hyperinsulinemia juga menunjukkan ketahanan insulin pada tisu-tisu badan, yang merupakan ciri-ciri mana-mana proses keradangan yang aktif, khususnya khusus. Penentuan fungsi glukokortikoid kelenjar adrenal dengan tuberkulosis pulmonari aktif mendedahkan kehadiran hypercorticism dalam kebanyakan pesakit. Penunjuk normal kepekatan kortisol darah dalam pesakit dengan keradangan berjangkit dalam tempoh akut harus dianggap sebagai kekurangan relatif fungsi glukokortikoid korteks adrenal, yang dapat dijadikan sebagai asas untuk terapi penggantian dengan dosis glukokortikoid yang mencukupi.

Hampir satu pertiga daripada pesakit dengan tuberkulosis pulmonari boleh dibuktikan bahawa paras insulinemia mereka agak rendah dan mendekati batas yang lebih rendah dari norma, manakala 13-20% melihat hiperinsulinisme yang signifikan. Kedua-dua hypo-dan hiperinsulinisme relatif adalah faktor risiko tinggi untuk perkembangan gangguan metabolisme karbohidrat yang mempunyai kepelbagaian yang berbeza-beza. Perubahan dalam aktiviti fungsional sel B pankreas memerlukan kawalan glisemik secara tetap pada pesakit dengan batuk kering dan pencegahan diabetes yang tepat pada masanya. Selain itu. Ini berfungsi sebagai rasional tambahan untuk penggunaan dos fisiologi insulin dalam terapi kompleks tuberkulosis.

Secara umum, pengurangan tahap hormon tiroid, ketidakseimbangan, hypercortisolemia dan hyperinsulinism adalah paling ketara pada pesakit dengan proses suntikan yang teruk, dengan lesi paru-paru yang meluas dan gejala parah mabuk yang teruk.

Diagnosis mikrobiologi tuberkulosis

Kajian mikrobiologi diperlukan untuk mengenal pasti pesakit dengan batuk kering, mengesahkan diagnosis, pemantauan dan pembetulan kemoterapi, menilai hasil rawatan, dengan kata lain, dari masa pendaftaran pesakit dengan tuberkulosis sehingga penyingkiran dari daftar.

Semua program dan projek epidemiologi adalah berdasarkan anggaran bilangan kuman yang tidak dapat dilakukan tanpa menggunakan kaedah makmal untuk mengesan mycobacterium tuberculosis. Apabila memeriksa perundingan populasi yang tidak teratur yang dipanggil, peratusan ekskretae bakteria mencapai 70 atau lebih, yang menjadikan kaedah makmal agak berkesan untuk mengenal pasti pesakit dengan tuberkulosis di kalangan kumpulan penduduk ini.

Kaedah mikrobiologi tradisional untuk diagnosis tuberkulosis - kajian bacterioscopic dan budaya. Kaedah moden menganggap penanaman mycobacterium tuberculosis dalam sistem automatik, PCR. Walau bagaimanapun, semua kaedah ini semestinya digabungkan dengan kaedah bakteriologi klasik.

Pengumpulan bahan diagnostik

Keberkesanan kajian makmal bergantung pada kualiti bahan diagnostik. Mematuhi peraturan untuk pengumpulan, penyimpanan dan pengangkutan bahan diagnostik dan pelaksanaan tepat algoritma untuk memeriksa pesakit secara langsung mempengaruhi keputusan dan memastikan keselamatan biologi.

Untuk kajian mengenai batuk kering menggunakan pelbagai bahan. Oleh kerana tuberkulosis pulmonari adalah bentuk lesi tuberculosis yang paling biasa, sputum dan lain-lain jenis rembesan pokok tracheobronchial dianggap sebagai bahan utama untuk kajian: pelepasan saluran pernafasan atas yang diperoleh selepas penyedutan aerosol: air penyejuk bronkial; lavages bronchoalveolar; bahan yang diperolehi oleh bronkoskopi, transtrakeal dan biopsi intrapulmonary: aspirat dari bronkus, laring larut, perut, luka dari luka, dsb.

Keberkesanan penyelidikan bertambah jika mereka menjalankan pengumpulan bahan terkawal dari pesakit. Untuk melakukan ini, peruntukkan bilik yang dilengkapi khas atau membeli kabin khas. Mengumpul bahan adalah prosedur berbahaya, jadi anda perlu mengumpul bahan untuk penyelidikan, mengikuti peraturan keselamatan berjangkit.

Bahan untuk penyelidikan pada mycobacterium tuberculosis dikumpulkan dalam botol steril dengan topi ketat diskru untuk mengelakkan pencemaran alam sekitar dan untuk melindungi bahan yang dikumpulkan dari pencemaran.

Vial untuk mengumpul bahan diagnostik mesti memenuhi keperluan berikut:

  • mesti dibuat daripada bahan tahan impak;
  • harus melelut dengan mudah semasa autoklaf;
  • menjadi jumlah yang mencukupi (40-50 ml):
  • mempunyai pembukaan yang luas untuk pengumpulan dahak (diameter tidak kurang daripada 30 mm);
  • mudah digunakan, telus atau lut, supaya anda boleh menilai kuantiti dan kualiti sampel yang dikumpul tanpa membuka tudung.

Untuk mendapatkan hasil penyelidikan yang optimum, syarat berikut mesti dipenuhi:

  • Pengumpulan bahan dijalankan sebelum kemoterapi bermula;
  • bahan untuk kajian itu mesti dikumpulkan sebelum pengambilan makanan dan dadah pagi;
  • untuk penyelidikan ia adalah wajar untuk mengumpul sekurang-kurangnya 3 contoh dahak pagi. Kumpulkan sputum selama 3 hari berturut-turut;
  • Bahan yang dikumpulkan mesti dihantar ke makmal secepat mungkin:
  • dalam kes apabila tidak mungkin untuk menyampaikan bahan ke makmal dengan serta-merta, ia disimpan dalam peti sejuk pada suhu udara 4 ° C tidak melebihi 48 jam;
  • apabila mengangkut bahan, adalah perlu untuk memantau integriti vials dengan teliti.

Sputum yang dikumpulkan dengan betul mempunyai watak lendir atau mukosa. Jumlah volum yang diselidiki dalam sputum adalah 3-5 ml.

Pankre dikumpulkan di bawah pengawasan seorang profesional perubatan. Orang yang bertanggungjawab untuk mengumpul dahak, adalah perlu untuk memantau pelaksanaan peraturan tertentu:

  • Ia perlu untuk menjelaskan kepada pesakit tujuan kajian dan keperluan untuk batuk tidak air liur atau nasofaring nasofaring, tetapi kandungan saluran pernapasan dalam. Ini dapat dicapai akibat batuk produktif yang berlaku selepas beberapa nafas dalam (2-3) dalam. Ia juga perlu untuk memberi amaran kepada pesakit bahawa dia mesti terlebih dahulu membilas mulutnya dengan air rebus untuk mengeluarkan bahagian utama mikroflora vegetatif dalam rongga mulut dan serpihan makanan yang menghalang kajian sputum;
  • seorang pekerja perubatan yang mengambil bahagian dalam pengumpulan dadah, selain jubah dan topi, mesti memakai topeng, sarung tangan getah dan apron getah;
  • berdiri di belakang pesakit, dia disyorkan untuk menyimpan botol sedekat mungkin ke bibir dan segera memisahkan sputum ke dalamnya kerana ia batuk, sementara itu perlu untuk menyediakan bahawa aliran udara diarahkan dari penyedia penjagaan kesihatan:
  • Apabila selesai pengumpulan dadah, profesional perubatan harus menutup botol dengan penutup dan menilai kuantiti dan kualiti sputum yang dikumpulkan. Kemudian botol dilabel dan diletakkan di dalam bix khas untuk pengangkutan ke makmal.

Sekiranya pesakit tidak memancarkan kuman, maka malam sebelum dan awal pagi pada hari pengumpulan bahan perlu diberi ekspektoran: ekstrak ubat Altea (mukaltin), bromhexin, ambroxol, dan lain-lain - atau gunakan penyedutan yang teriritasi dengan menggunakan peralatan yang dipasang di bilik pengumpulan dahaga Bahan yang dikumpul dengan cara ini tidak dapat dipelihara dan mesti diperiksa pada hari pengumpulan. Untuk mengelakkan "penolakan" beliau di makmal ke arah itu harus membuat tanda khas.

Sekiranya penyelidikan mikrobiologi tidak dilakukan di institusi ini, bahan diagnostik yang dikumpul hendaklah dihantar secara berpusat ke makmal, tertakluk kepada pemeliharaan mandatori bahan antara penghantaran dalam peti sejuk atau dengan penggunaan bahan pengawet. Sampaikan bahan tersebut ke makmal di dalam kotak penghantaran yang mudah disucikan. Setiap sampel mesti dilabelkan dengan label yang sesuai, dan keseluruhan kumpulan mesti diisi dengan borang yang disertakan.

Mod dan kekerapan pemeriksaan pesakit

Semasa diagnostik awal, pemeriksaan pesakit untuk batuk kering, adalah perlu untuk menyiasat sekurang-kurangnya 3 hidangan sputum dalam masa 2 atau 3 hari. dikumpulkan di bawah pengawasan kakitangan perubatan, yang meningkatkan keberkesanan mikroskopi.

Pemeriksaan tuberkulosis utama hendaklah dijalankan oleh semua institusi diagnostik perubatan sistem kesihatan. Baru-baru ini, untuk meningkatkan keberkesanan pemeriksaan primer, berdasarkan makmal diagnostik klinikal, pusat mikroskop yang dipanggil telah dianjurkan, dilengkapi dengan mikroskop moden dan peralatan untuk memastikan keselamatan epidemik.

Di dalam kemudahan TB, satu jadual pemeriksaan digunakan, yang melibatkan kajian mengenai sputum atau bahan diagnostik lain sekurang-kurangnya 3 kali dalam masa 3 hari. Semasa rawatan, kajian mikrobiologi dijalankan secara teratur, sekurang-kurangnya sekali sebulan, dalam fasa kemoterapi intensif. Semasa peralihan ke fasa susulan, kajian dilakukan kurang kerap - pada selang 2-3 bulan, sementara kepelbagaian kajian dikurangkan menjadi dua.

Ciri pengumpulan bahan diagnostik dalam batuk kering ekstrapulmonari

Keistimewaan bahan patologi dalam bentuk tuberkulosis extrapulmonary adalah kepekatan rendah mycobacterium tuberculosis di dalamnya, yang memerlukan lebih banyak kaedah sensitif penyelidikan mikrobiologi, pertama sekali, kaedah menanam pada medium nutrien.

Dalam batuk kering urogenital, air kencing adalah bahan penyelidikan yang paling mudah diakses. Persampelan air kencing harus dilakukan oleh jururawat terlatih.

Perut luar mencuci dengan sabun dan air atau larutan kalium permanganat yang lemah. Berhati-hati memproses pembukaan uretra luar. Sebahagian kecil air kencing pagi dikumpulkan dalam botol steril: pada lelaki - secara semula jadi, pada wanita - dengan kateter. Urin dari pelvis buah pinggang dikumpulkan dalam tiub steril untuk catheterization satu atau dua buah pinggang, dalam kes kedua - semestinya secara berasingan dari setiap buah pinggang. Sebilangan kecil air kencing ini disentri, precipitate diperiksa.

Pada lelaki, air mani, punctates testis, rembesan prostat disentri untuk mendapatkan sedimen. Di mana-mana lokalisasi proses tertentu dalam kawasan kelamin pada lelaki, urut kelenjar prostat boleh menyumbang kepada rembesan tuberkulosis mycobacterium yang mengandungi rembesan.

Darah haid dikumpulkan dari wanita dengan sedutan atau menggunakan topi Kafka. Bahan yang dihasilkan dibebaskan dari sel darah merah, mencuci dengan air suling, diikuti oleh sentrifugasi. Sedimen disiasat.

Pelepasan dari kanal serviks uterus dikumpulkan dalam mana-mana bekas atau topi Kafka, iaitu, ia dikehendaki untuk mengumpul 1-2 ml bahan patologi.

Bahan yang diperoleh semasa pembedahan pada buah pinggang, alat kelamin. biopsi, pengikatan dari endometrium, homogenisasi. Untuk melakukan ini, ia diletakkan di dalam mortar steril dan dihancurkan dengan gunting steril. Pasir sungai steril ditambah kepada penggantungan yang terhasil dalam jumlah yang sama dengan jisimnya, maka 0.5-1.0 ml larutan natrium klorida isotonik ditambah dan keseluruhannya adalah tanah untuk membentuk jisim mangsa dengan penambahan larutan natrium klorida isotonik (4-5 ml). Kemudian jisim dibenarkan untuk menyelesaikan 1-1.5 minit, supernatan itu diperiksa.

Tuberkulosis tulang dan sendi. Memudar (nanah abses), yang diperolehi dengan jarum suntikan steril, dimasukkan ke dalam bekas steril dan segera dihantar ke makmal. Pam steril, sebelum dibasahkan dengan larutan natrium klorida isotonik steril, ambil 2-5 ml nanah, pindahkannya ke botol dengan manik dan tambah lagi 2-3 ml larutan natrium klorida isotonik. Botol ditutup dengan penutup dan digoncang di alat jenaka selama 8-10 minit. Buburan homogen adalah diperiksa.

Untuk bentuk tuberkulosis osteo-artikular yang fistulous, nanah diambil dari fistula. Pelepasan berlimpah dikumpulkan terus ke dalam tiub. Dalam kes-kes pelepasan najis, fistula dibasuh dengan larutan isotonik natrium klorida steril, dan air membasuh yang dikumpulkan dalam tiub ujian atau sepotong tampon direndam di dalam pus dihantar untuk pemeriksaan.

Bahan pembedahan yang diperoleh semasa pembedahan pada tulang dan sendi, boleh terdiri daripada massa pura-nekrotik, granulasi, parut, tisu tulang, tisu membran sinovial dan substrat lain. Ia diproses seperti dalam tuberkulosis buah pinggang.

Pemeriksaan mikrobiologi cecair sinovial dalam penyelesaian larutan natrium sitrat 3% (nisbah 1: 1) untuk mencegah pembekuan dilakukan secara langsung selepas tusuk.

Tuberkulosis nodus limfa. Ubi yang diekstrak semasa tusukan nodus limfa juga diperiksa. sebagai nanah abses usus. Tisu nod limfa yang diperoleh semasa pembedahan, biopsi, diperiksa seperti dalam bentuk tuberkulosis lain.

Kajian massa berjalur untuk mycobacterium tuberculosis sangat jarang berlaku kerana ketiadaan hampir hasil positif.

Mycobacteria mikroskopi

Mikroskopi sputum adalah kaedah yang agak cepat, mudah dan murah yang harus digunakan dalam semua kes yang disyaki batuk kering. Di samping itu, kajian ini dijalankan untuk menilai keberkesanan kemoterapi dan untuk mewujudkan pemulihan atau hasil rawatan yang tidak berjaya dalam ketiadaan hasil kebudayaan.

Gunakan 2 kaedah peperiksaan mikroskopik:

  • kaedah mikroskopi langsung, apabila suatu smear disediakan secara langsung dari bahan diagnostik;
  • kaedah mikroskopi sedimen yang disediakan daripada bahan yang tidak boleh ditulen untuk kebudayaan.

Kaedah pertama digunakan di makmal di mana hanya pemeriksaan mikroskopik dilakukan (makmal diagnostik klinikal rangkaian perubatan umum).

Hasil pemeriksaan mikroskopik terbaik diperoleh dengan menumpukan perhatian pada bahan diagnostik (contohnya, melalui sentrifugasi).

Untuk mengesan mycobacterium tuberculosis dengan peluang 50% mikroskopi, 1 ml sputum harus mengandungi lebih daripada 5,000 sel mikroba. Pankal pesakit dengan bentuk tuberkulosis pulmonari biasanya mengandungi sejumlah besar bakteria tahan asid, yang membolehkan mereka untuk mengenali mereka dengan yakin semasa bakterioskopi. Kepekaan diagnostik kaedah ini boleh dipertingkatkan dengan memeriksa beberapa sampel dahak dari satu pesakit. Bakterioskopi negatif tidak mengecualikan diagnosis tuberkulosis, kerana beberapa pesakit 'dahak mengandungi kurang mikobakteria daripada yang dapat dikesan oleh mikroskopi. Penyediaan yang lemah dalam pil perut juga boleh menyebabkan pemeriksaan bacterioscopic negatif.

Kaedah yang paling biasa untuk mengesan mycobacteria yang cepat asid dalam smear adalah pewarna mengikut Ziehl-Nelsen. Kaedah ini didasarkan pada penembusan fuchsin karbol ke sel mikroba melalui membran, yang termasuk lapisan lilin-lipid, dengan kesan pemanasan serentak dan kesan etsa kuat fenol. Perubahan warna pada smear dengan larutan 25% asid sulfurik atau alkohol hidroklorik 3% menyebabkan perubahan warna semua struktur tidak tahan asid. Unsur-unsur smear yang terlewat berwarna dengan larutan 0.3% biru metilena. Mycobacteria tidak melihat pewarna aniline yang biasa, akibatnya mikobakteria yang tahan asid dicat dalam warna raspberi-merah, dan mikroba dan unsur-unsur selular lain - berwarna biru.

Untuk memeriksa smear berwarna dengan Zilu-Nelsen, mikroskop binokular ringan dengan tujuan perendaman (90 atau 100 kali pembesaran) dan lensa kanta dengan pembesaran 7 atau 10 kali digunakan. Periksa 100 bidang pandangan, yang cukup untuk mengenal pasti dalam mycobacteria tunggal. Sekiranya keputusan kajian sedemikian negatif, disarankan untuk melihat 200 bidang pandangan untuk mengesahkannya. Rekodkan hasilnya, menunjukkan bilangan mycobacteria yang tahan asid (CUM) yang dikesan.

Sebagai tambahan kepada teknik ini, fluorochromes digunakan untuk mikroskopi pendarfluor, yang membolehkan untuk mencapai hasil yang terbaik. Penggunaan kaedah ini meningkatkan kecekapan mikroskopi sebanyak 10-15%. Apabila merawat mycobacterium dengan pewarna luminescent (auramine, rhodamine, dan sebagainya), bahan ini juga dikaitkan dengan struktur lilin seperti sel mikroba. Apabila sel dicat disinari dengan sumber cahaya yang menarik (spektrum radiasi ultraviolet tertentu), mereka mula menyalakan oren atau cahaya merah terang terhadap latar belakang hijau hitam atau gelap. Oleh kerana kecerahan tinggi dan kontras imej yang kelihatan, mungkin untuk mengurangkan pembesaran keseluruhan mikroskop sebanyak 4-10 kali, yang memperluas bidang paparan dan mengurangkan masa tontonan penyediaan. Seiring dengan ini, kerana bidang kedalaman yang lebih besar, dapat meningkatkan kenyamanan kajian.

Apabila menggunakan mikroskopi pendarfluor, ia mengambil masa yang lebih sedikit untuk melihat kawasan yang sama dengan smear daripada dengan mikroskopi cahaya smear yang berwarna dengan Tsil-Nelsen. Jika semasa hari kerja mikroskop kelihatan kira-kira 20-25 smear tersebut, kemudian menggunakan mikroskop pendarfluor, dia boleh memeriksa lebih daripada 60-80 sampel pada masa yang sama. Mikroskopis yang berpengalaman tahu bahawa pencelupan sel dengan campuran auramin dan rhodamine adalah dalam beberapa cara khusus untuk mikrob bakteria yang tahan asid, yang dalam kes ini mempunyai penampilan kayu emas. Saprophytes berwarna kehijauan.

Satu lagi kelebihan penting kaedah mikroskopi pendarfluor adalah keupayaan untuk mengesan mikobakteria yang diubahsuai yang telah hilang di bawah pengaruh beberapa faktor yang tidak menguntungkan, khususnya kemoterapi intensif, sifat rintangan asid dan tidak dikesan dalam hubungan ini apabila ternoda dengan Tsil-Nelsen.

Kelemahan mikroskopi pendarfluor termasuk kos mikroskop yang agak tinggi dan operasinya. Walau bagaimanapun, di makmal besar berpusat atau lain-lain, di mana beban melebihi kadar 3 juruteknik yang bekerja dengan tiga mikroskop konvensional, lebih murah menggunakan mikroskop pendarfluor tunggal sebaliknya.

Kaedah bakterioskopik mempunyai kekhususan yang agak tinggi (89-100%). Kira-kira 97% daripada keputusan positif yang diperolehi oleh kaedah mikroskopi dengan jelas disahkan oleh hasil pembenihan.

Harus diingat bahawa pemeriksaan mikroskopik sejenis bahan patologi tidak dapat menentukan spesies mycobacteria yang tahan asid yang dikenal pasti. Kaedah mikroskopi membolehkan kita membuat kesimpulan hanya tentang kehadiran atau ketiadaan mikroorganisma yang tahan asid dalam penyediaan, yang dijelaskan oleh kewujudan sejumlah besar mikroorganisma yang tahan bakteria bukan morfologi secara morfologi mirip dengan mikobakteria.

Penilaian hasil mikroskop yang dihasilkan dalam unit semi kuantitatif.

Untuk dapat membandingkan hasil kaedah mikroskopi yang berbeza, pekali empirikal diperkenalkan. Sebagai contoh, untuk membandingkan hasil daripada smear berwarna dengan pewarna pendarfluor dengan data mikroskopi cahaya (pembesaran 1000x), perlu membahagikan jumlah mycobacteria yang tahan asid yang dikesan oleh mikroskop fluoresen dengan faktor sepadan dengan pembesaran 250x mikroskop sebanyak 10, dengan 450 kali ganda - pada 4, dengan 630 kali ganda - pada 2.

Ciri-ciri mikroskopi dalam batuk kering ekstrapulmonari

Mikroskop langsung dilakukan, serta mikroskopi smear yang disediakan selepas pengayaan, diikuti oleh pewarna Zill-Nelsen atau pewarna luminescent. Mikroskopi smear langsung tidak berkesan kerana kepekatan mycobacteria rendah dalam bahan, dan oleh itu lebih rasional menggunakan kaedah pengayaan. Centrifugation adalah yang paling berkesan. Jika bahan biologi likat, sentrifugasi digunakan dengan homogenisasi serapan dan pencairan bahan, yang dijalankan menggunakan sentrifugal berkepala tinggi dengan daya empar 3000 g dan penyelesaian hipoklorit. Kaedah pengayaan lain, seperti mikroflotasi, kini tidak digunakan kerana pembentukan aerosol berbahaya secara biologi.

Kaedah budaya untuk diagnosis tuberkulosis

Kaedah pembiakan, atau kaedah kultur, lebih sensitif daripada mikroskopi smear, dan mempunyai beberapa kelebihan berbanding yang lain. Ia membolehkan mengesan beberapa puluh mycobacteria yang berdaya maju dalam bahan yang dikaji dan mempunyai nilai diagnostik yang hebat. Ini amat penting dalam kajian bahan dari pesakit yang baru didiagnosis atau dirawat yang merembeskan sedikit mikobakteria.

Berbanding dengan mikroskopi, kajian kultur boleh meningkatkan bilangan pesakit tuberkulosis yang dikenalpasti oleh lebih daripada 15-25%, dan juga mengesahkan tuberkulosis pada peringkat terdahulu, apabila penyakit itu masih boleh dirawat dengan baik. Keuntungan yang sangat penting dalam penyelidikan kebudayaan adalah kemungkinan mendapatkan kultur patogen, yang dapat dikenalpasti dan dikaji berkaitan dengan sensitiviti dadah, virulensi dan sifat biologi yang lain.

Kekurangan kaedah penanaman termasuk tempoh mereka (masa menunggu untuk bahan mencapai 10 minggu). kos yang lebih tinggi, kompleksitas pemprosesan bahan diagnostik.

Prinsip prasyarat rawatan bahan diagnostik

Teknik mikrobiologi konvensional tidak boleh digunakan dalam penyelidikan mengenai tuberkulosis. Ini disebabkan hakikatnya. bahawa mycobacterium tuberculosis tumbuh sangat perlahan, dan kebanyakan sampel bahan klinikal mengandungi mikroorganisma pyogenic dan putrefactive yang berkembang pesat, kulat. Pertumbuhan pesat mereka terhadap media nutrien yang kaya menghalang perkembangan mikobakteri dan tidak membenarkan untuk mengasingkan agen penyebab tuberkulosis, oleh itu, sebelum menyemai, bahan diagnostik mesti dipersiapkan. Di samping itu, mikobakteria yang dilepaskan dari saluran pernafasan pesakit biasanya dikelilingi oleh sejumlah besar mukus, yang menjadikannya sukar untuk menumpukan perhatian. Dalam hal ini, sebelum menyembur dermat dan bahan-bahan lain yang serupa, pencairan dan dekontaminasi mereka diperlukan.

Semua detergen dan dekontaminants mempunyai kesan toksik yang lebih ketara terhadap mikobakteria. Akibat rawatan, sehingga 90% mikobakteria boleh mati. Untuk memelihara sebahagian besar populasi mikobakteri, perlu menggunakan kaedah pemprosesan yang lembut yang membenarkan satu mikroorganisma pyogenic dan putrefactive yang berkembang pesat, dan di sisi lain, untuk memelihara daya hidup mikobakteria yang hadir dalam bahan tersebut.

Bergantung kepada bahan, darjah homogen dan kontaminasi, dekontaminasi yang berbeza digunakan untuk memperlahankan rawatan: untuk penyelesaian sputum - natrium hidroksida 4%, larutan natrium fosfat 10%, benzalkonium klorida trisodium fosfat, NALC-NaOH (N-asetil-L-cysteine- natrium hidroksida) dengan kepekatan NaOH terakhir sebanyak 1%, untuk air kencing dan bahan cecair lain - larutan asid sulfurik 3%, untuk sampel yang tercemar, bahan yang mengandungi lemak - larutan asid oksalik sehingga 5%. Di samping itu, dalam beberapa kes, gunakan enzim, surfactants (detergen). Penggunaan tween dan beberapa detergen lain disertai oleh kematian sel mikobakteri yang kurang (40-50% hidup). Walau bagaimanapun, ia hanya boleh digunakan untuk bahan cecair. Yang paling meluas di dunia menerima NALC-NaOH. dikeluarkan dalam set. Kaedah ini membolehkan untuk mengasingkan lebih daripada 85% daripada populasi sel mikobakteri. Dekontaminasi bahan pepejal yang mengandungi tisu lebih sukar, kerana sukar untuk meneka tahap penyebaran bahan dalam proses homogenisasi. Sebagai contoh, pemprosesan spesimen biopsi kelenjar limfa sering disertai oleh peningkatan kekerapan pencemaran dengan flora luaran. Dalam kes ini, 1% etonium boleh digunakan.

Bahan non-homogen homogenisasi menggunakan manik kaca dengan kehadiran dekontaminasi. Bahan cair adalah pra-sentrifuged dan sedimen hanya diproses.

Teknik penanaman dan pengeraman

Selepas pretreatment, bahan tersebut disentri, kerana mikobakteria itu dicetuskan dan kandungannya dalam sedimen meningkat ("pengayaan sedimen"). Pendakian yang terhasil tertakluk kepada peneutralan dan biji dengannya (inokulasi) permukaan media nutrien padat atau tiub ujian dengan media cecair (cecair). Dari bahagian sedimen sedimen, smear disediakan untuk peperiksaan mikroskopik. Teknik pembenihan harus menghalang pencemaran silang dari bahan diagnostik.

Untuk tafsiran klinikal yang boleh dipercayai mengenai hasil penyelidikan mikrobiologi, adalah perlu untuk memerhatikan kaedah berikut: kajian mikroskopik dan kebudayaan hendaklah dijalankan secara selari dari sampel diagnostik yang sama.

Tiub tersenarai diletakkan dalam termostat pada suhu 37 o C selama 2 hari dalam kedudukan mendatar. Ini memberikan penyerapan bahan seragam yang lebih seragam ke dalam medium nutrien. Selepas 2 hari, tiub dipindahkan ke kedudukan menegak dan tertutup rapat dengan pelindung getah atau silikon untuk mengelakkan media unggulan daripada mengering.

Tanaman disimpan dalam termostat pada 37 o C selama 10-12 minggu dengan tontonan mingguan biasa. Dengan setiap paparan ujian, parameter berikut direkodkan:

  • istilah yang diperhatikan secara visual dari tarikh pertumbuhan menyemai;
  • kadar pertumbuhan (bilangan CFU);
  • pencemaran penanaman dengan flora mikrob luar atau kulat (tiub sedemikian dikeluarkan);
  • tiada pertumbuhan yang boleh dilihat. Tiub dibiarkan dalam termostat sehingga tontonan seterusnya.

Media nutrien

Untuk penanaman mikobakteria menggunakan media nutrien yang berlainan; padat, separa cecair, cecair. Walau bagaimanapun, tidak ada media nutrien yang diketahui mempunyai ciri-ciri yang menjamin pertumbuhan semua sel mikrobakteria. Dalam hal ini, untuk meningkatkan prestasi, disyorkan untuk menggunakan media nutrien secara serentak 2-3 komposisi yang berbeza.

Sebagai medium standard untuk pengasingan utama agen penyebab tuberkulosis dan penentuan kepekaan dadah, WHO mengesyorkan medium Lowenstein-Jensen. Ini adalah medium telur padat di mana pertumbuhan mikobakteria diperoleh pada hari ke-20-25 selepas pembenihan bahan bakterioskopik positif. Tanaman bahan negatif bacterioscopically memerlukan tempoh inkubasi yang lebih lama (sehingga 10-12 minggu).

Di negara kita, pengagihan yang dicadangkan oleh E.R. Finn Telur Medium Finn II. Ia berbeza berbanding dengan L-asparagine ia menggunakan monosodium glutamat, yang mencetuskan cara lain sintesis asid amino mikobakteria. Pertumbuhan muncul pada medium ini sedikit lebih awal, dan kekerapan rembesan mikobakteria adalah 6-8% lebih tinggi daripada pada Levenshtein - Jensen sederhana.

Untuk meningkatkan kecekapan diagnosis bakteria bagi tuberkulosis ekstrapulmonary, disarankan untuk memasukkan media diubahsuai Finn-II dalam kompleks media nutrien. Untuk mempercepat pertumbuhan, natrium thioglycolate (0.05%) ditambah kepada medium nutrien Finn-II, yang mengurangkan kepekatan oksigen. Untuk melindungi sistem enzim mycobacterial dari produk toksik lipid peroxidation, antioksidan α-tokoferol asetat dimasukkan ke dalam medium nutrien Finn-II pada kepekatan 0.001 μg / ml. Menyemai bahan diagnostik yang dihasilkan oleh kaedah standard.

Di makmal TB Rusia, pengubahsuaian media nutrien pepejal juga digunakan; yang dicadangkan oleh G.G. Medium nutrien Mordovian "Baru", yang dibangunkan oleh V.A. Medium nutrien anikin A-6 dan A-9, dsb.

Oleh sebab semasa kemoterapi, pelbagai sistem metabolik sel mikrobial rosak, sebahagian daripada populasi mikobakteria kehilangan keupayaannya untuk berkembang secara normal pada media nutrien biasa dan memerlukan media nutrien yang seimbang (media cecair atau cecair) secara osmotik.

Penilaian dan rekod hasil penyebaran bahan diagnostik

Sesetengah jenis dan jenis mycobacteria tumbuh dengan perlahan, pertumbuhan boleh muncul walaupun pada hari ke-90. Bilangan tanaman sedemikian kecil, tetapi ia menyebabkan mereka menahan tanaman dalam termostat selama 2.5-3 bulan.

Kultur kekotoran mycobacterium tuberculosis biasanya tumbuh pada media telur padat dalam bentuk bentuk R-koloni pelbagai saiz dan spesies. Tanah jajanan kering, berkedut, gading, sedikit pigmen. Dalam persekitaran lain, koloni Mycobacterium tuberculosis mungkin lebih lembap. Selepas kursus kemoterapi atau dalam rawatan, koloni halus dengan pertumbuhan basah (S-bentuk) boleh dibebaskan.

Apabila mengasingkan tanaman, satu set kajian khusus digunakan untuk membezakan mycobacterium tuberculosis daripada mycobacteria yang tidak berbahaya dan saprophytes yang tahan asid.

Jawapan yang positif diberikan selepas peperiksaan mikroskopik mandatori suatu smear yang berwarna dengan Zil-Nelsen dari koloni yang ditanam. Dalam hal pertumbuhan mycobacteria dalam smears, rod merah terang dijumpai, berbohong secara tunggal atau dalam kumpulan, membentuk kelompok dalam bentuk terasa atau braids. Dalam budaya muda, terutamanya yang terpencil dari pesakit yang dirawat dengan kemoterapi untuk masa yang lama, mikobakteria dicirikan oleh polimorfisme diucapkan, sehingga kehadiran pendek, hampir coccoid atau varian elongated, mirip dengan miselium kulat, bersama dengan bentuk berbentuk batang.

Kadar pertumbuhan mikobakteria ditunjukkan oleh skim berikut: (+) - 1-20 CFU dalam tiub ujian (pengimbunan bakteria yang kurang); (++) - 20-100 CFU in vitro (penyingkiran bakteria sederhana); (+++) -> 100 CFU in vitro (ekskresi bakteria yang banyak). Dalam diagnosis makmal tuberkulosis, tidak cukup untuk memberi jawapan, sama ada atau tidak mycobacterium dikesan oleh kaedah ini atau itu. mempunyai pemahaman terperinci mengenai jumlah dan sifat populasi mikobakteria, komposisi dan sifatnya. Ia adalah data yang memungkinkan untuk mentafsirkan keadaan proses dengan betul, merancang taktik dan segera membetulkan rawatan.

Dalam tahun-tahun kebelakangan ini, untuk mempercepat pertumbuhan mikobakteria, media nutrien pada asas agar dengan pelbagai pertumbuhan tambahan dan penggunaan campuran gas khas telah dicadangkan. Untuk mendapatkan pertumbuhan mycobacteria pada persekitaran ini semasa penanaman mewujudkan suasana dengan kandungan karbon dioksida yang tinggi (4-7%). Untuk tujuan ini, gunakan DENGAN khas2-inkubator. Walau bagaimanapun, sistem automatik yang paling maju untuk penanaman mikobakteria: MGIT-BACTEC-960 dan MB / Bact.

Salah satu sistem tersebut adalah sistem MGIT (pertumbuhan mycobacteria indicating tube), yang dimiliki oleh perkembangan teknologi tinggi dan direka untuk mempercepat diagnosis bakteria tuberkulosis dan menentukan kepekaan mikobakteria untuk ubat pertama dan beberapa ubat baris kedua. MGIT difokuskan untuk menggunakannya sebagai sebahagian daripada peranti VASTES-960. Mikroorganisma ditanam dalam tabung khas dengan medium nutrien cecair berdasarkan medium Middlebrook-7H9 yang diubahsuai. Untuk merangsang pertumbuhan mycobacteria dan menghalang pertumbuhan mikroflora luaran, suplemen pertumbuhan MGIT Growth Supplement dan campuran ubat antibakteria PANTA digunakan.

Pendaftaran pertumbuhan mikroorganisma dijalankan secara optik. Ia berdasarkan pendarfluor yang timbul daripada pengambilan oksigen oleh mikobakteria dalam proses pertumbuhan. Pewarna fluorochrome yang bergantung kepada oksigen terkandung di bahagian bawah tiub ujian khas dan disalut dengan lapisan silikon. Pengeluaran semula mikobakteria membawa kepada pengurangan jumlah oksigen di dalam tiub dan penurunan kepekatannya, yang menyebabkan peningkatan dalam pendarfluor, yang dapat dilihat apabila tiub disinari dengan cahaya ultraviolet dan secara automatik dikesan oleh sensor foto yang dibina ke dalam peranti VASTES-960. Keamatan cahaya yang dicatatkan dalam unit pertumbuhan (GU-growth units). Data pertumbuhan dimasukkan ke dalam komputer di mana ia boleh disimpan secara automatik. Analisis komputer lengkung pertumbuhan boleh memberi maklumat mengenai kehadiran pelbagai kolam mikobakteria, termasuk yang tidak berbahaya, dan juga membantu menilai sifat pertumbuhan mikobakteria.

Hasil daripada pengenalan sistem sedemikian, masa kemunculan pertumbuhan mikobakteria berkurangan dengan ketara sebanyak 11 hari pada WASTES-960 dan 19 hari pada MB / Bact berbanding 33 hari pada medium nutrien padat standard. Perlu diingatkan bahawa sistem ini memerlukan kakitangan yang berkelayakan. Menyemai bahan pada media cecair mesti disertai dengan menanam pada medium Levenshteyn-Jensen, yang memainkan peranan pendirian dalam kes di mana tuberkulosis tidak menimbulkan pertumbuhan pada media lain.

Penentuan kepekaan ubat mikobakteria

Menentukan spektrum dan darjah kepekaan mikobakteria terhadap ubat anti-tuberkulosis adalah penting dalam klinikal, dan juga untuk penilaian epidemiologi penyebaran tuberkulosis yang tahan dadah. Di samping itu, pemantauan rintangan dadah membolehkan untuk menilai keberkesanan program anti-tuberkulosis secara keseluruhannya, sebagai penunjuk integral dari kerja semua komponen aktiviti anti-tuberkulosis.

Kepelbagaian dan masa kepekaan dadah:

  • sebelum permulaan rawatan sekali untuk menentukan strategi dan taktik rawatan:
  • apabila mengasingkan dari budaya pesakit dari pelbagai bahan (sputum, BAL, air kencing, exudates, cecair cerebrospinal, dan lain-lain), semua strain terpencil diperiksa:
  • pada akhir fasa intensif rawatan tanpa adanya dinamik klinikal dan radiologi:
  • jika perlu, tukar rejimen rawatan dalam hal:
    • kekurangan negativiti sputum;
    • semula budaya selepas negatif sputum;
    • peningkatan mendadak dalam bilangan KUM dalam smear selepas penurunan awal. Adalah diketahui bahawa strain Mycobacterium tuberculosis yang heterogen dari segi kepekaan dadah diasingkan dari bahan dari pesakit dengan tuberkulosis. Kepekaan strain untuk ubat anti-tuberkulosis mungkin berbeza dalam pelbagai ubat, darjah, kekerapan dan kadar rintangan.

Rintangan dadah Mycobacterium tuberculosis ditentukan mengikut kriteria yang ditetapkan, yang memberi tumpuan kepada kepentingan klinikal rintangan dan bergantung kepada aktiviti anti-tuberkulosis ubat, farmakokinetik, dan kepekatan pada lesi. dos terapeutik maksimum dan sebagainya.

Penentuan sensitiviti ubat mycobacteria kini dijalankan oleh kaedah mikrobiologi:

  • kepekatan mutlak (kaedah pencairan pada media nutrien pepejal atau cecair),
  • perkadaran
  • pekali rintangan.

Rintangan biasanya menunjukkan dirinya sebagai bentuk pertumbuhan koloni Mycobacterium tuberculosis yang diperhatikan secara visual, bagaimanapun, terdapat teknik-teknik yang mendorong pertumbuhan pada peringkat awal pembahagian sel Mycobacterium dalam bentuk reaksi warna. Kaedah ini mengurangkan masa ujian 3-4 hingga 2 minggu.

Kaedah kepekatan mutlak yang disyorkan oleh Jawatankuasa Kemoterapi WHO, yang secara metodologi paling mudah, tetapi memerlukan piawai dan ketepatan prosedur makmal yang tinggi, telah meluas di Rusia. Ujian kerentanan dadah terdiri daripada satu set tiub dengan medium nutrien yang diubah suai dengan ubat anti-tuberculosis. Kit terdiri daripada 2-3 tiub dengan kepekatan yang berbeza dari setiap ubat yang digunakan, satu tiub kawalan dengan medium tanpa ubat dan satu tiub yang mengandungi 1000 μg / ml natrium salisilat atau 500 μg / ml bagi asid nitrobenzoik untuk mengesan pertumbuhan mikobakteria yang tidak berbisa.

Untuk penyediaan satu set media dengan ubat-ubatan menggunakan Lowenstein-Jensen yang diubah suai (tanpa kanji), yang dicurahkan ke dalam botol. Dalam setiap botol menambah jumlah tertentu pengenceran yang sesuai ubat anti-TB. Kandungan termos yang dicampur dengan teliti, dicurahkan ke dalam tabung uji dan dilancarkan dalam posisi yang cenderung selama 40 minit pada suhu 85 ° C. Adalah disyorkan untuk membungkus medium dalam pemutar skru elektrik dengan kawalan suhu automatik. Sederhana dengan ubat anti-tuberkulosis

Baris pertama boleh disimpan dalam peti sejuk pada 2-4 ° C selama 1 bulan, dengan ubat barisan ke-2 - tidak lebih dari 2 minggu. Media simpanan dengan ubat pada suhu bilik tidak boleh diterima. Apabila menyediakan penyelesaian ubat-ubatan anti-tuberkulosis, aktiviti mereka diambil kira, mengira kepekatan, disesuaikan untuk berat molekul bahagian tidak spesifik ubat, kesucian, dan sebagainya. Untuk menentukan kepekaan dadah hanya menggunakan bahan kimia yang tulen.

Prinsip kaedah ini terdiri daripada menentukan kepekatan dadah anti-tuberculosis, yang menekan pertumbuhan sebahagian besar populasi mikobakteri. Apabila dilakukan dengan betul, kaedah ini mempunyai ketepatan yang baik.

Sebelum ujian, adalah perlu untuk memastikan bahawa budaya Mycobacterium tuberculosis yang dipilih tidak mempunyai mikroflora luaran. Dari budaya mycobacteria dalam penyelesaian 0.9% natrium klorida, penggantungan homogen disediakan mengandungi 500 juta sel mikroba dalam 1 ml (piawaian kekeruhan optik 5 unit). Penggantungan yang dihasilkan dicairkan dengan larutan natrium klorida 0.9% (1:10) dan 0.2 ml penggantungan ditambahkan ke setiap tiub satu set media kultur. Tiub yang disemai diletakkan dalam termostat pada 37 ° C dan disimpan dalam kedudukan mendatar selama 2-3 hari supaya permukaan serong medium nutrien disuntik dengan seragam dengan penggantungan mycobacterium tuberculosis. Kemudian tiub dipindahkan ke kedudukan menegak dan diinkubasi selama 3-4 minggu. Pengukuran keputusan dijalankan dalam 3-4 minggu.

Sejak masa pengasingan patogen dari bahan klinikal pada media nutrien adalah sekurang-kurangnya 1-1.5 bulan, keputusan menentukan kepekaan dadah dengan kaedah ini boleh didapati tidak lebih awal daripada 2-2.5 bulan selepas pembenihan bahan. Ini adalah salah satu kelemahan utama kaedah ini.

Terangkan hasil penentuan kepekaan ubat mycobacteria berdasarkan kriteria tertentu. Pada media yang padat, budaya dianggap sensitif terhadap kepekatan dadah yang terkandung di dalam medium jika bilangan koloni mycobacteria ditanam di tabung ini dengan ubat tidak melebihi 20 dengan pertumbuhan yang melimpah pada tiub kawalan tanpa dadah. Hanya dengan kehadiran lebih daripada 20 koloni, budaya dianggap sebagai tahan terhadap kepekatan ini. Dalam amalan, apabila menerima keputusan pertumbuhan dalam tiub ujian, hampir 20 CFU. adalah perlu untuk memberitahu unit klinikal bahawa sensitiviti atau kestabilan dalam kes ini adalah sifat sempadan, kerana kadang-kadang ini dapat menjelaskan dinamika samar-samar petunjuk klinikal.

Bagi pelbagai jenis ubat, kepekatan tertentu telah ditubuhkan di mana pendaraban populasi mikobakteria kritikal diperhatikan. Kepekatan ini dipanggil "kritikal". Sebagai kriteria kestabilan, kadar pertumbuhan populasi mikobakteri pada medium nutrien dengan ubat dalam kepekatan kritikal digunakan.

Dalam amalan fisiologi domestik dalam menentukan rintangan dadah tidak terhad kepada menentukan hanya kepekatan kritikal. Ini disebabkan hakikatnya. bahawa penentuan lanjutan tahap rintangan ubat patogen itu membolehkan doktor untuk lebih tepat membentuk taktik kemoterapi menggunakan pengetahuan mengenai kesan berpotensi gabungan ubat, untuk menjangkakan rintangan silang, atau untuk menggunakan dadah yang lebih berkesan kumpulan ubat anti-tuberkulosis yang digunakan.

Kaedah kepekatan mutlak adalah yang paling mudah, bagaimanapun, dan yang paling sensitif terhadap kesilapan dalam pelaksanaannya. Lebih dipercayai, terutamanya apabila menentukan kepekaan kepada ubat baris kedua, dan kaedah perkadaran adalah biasa di luar Rusia. Ia mengambil kira kelemahan kaedah tumpuan mutlak, tetapi ia lebih banyak memakan masa untuk melaksanakan.

Kaedah ini sangat serupa dengan kaedah kepekatan mutlak. Penyediaan tiub ujian dengan ubat yang dihasilkan dengan cara yang sama. seperti dengan kaedah kepekatan mutlak. Walau bagaimanapun, dos penyebaran penggantungan Mycobacterium tuberculosis dikurangkan sebanyak 10 kali. bahawa tahap kekerapan rintangan spontan beberapa strain Mycobacterium tuberculosis kepada ubat-ubatan seperti etambutol, protionamide, capreomycin. Sebagai kawalan, gunakan 2 atau 3 tiub dengan dos biji yang sama dengan tiub ujian, dicairkan secara seram 10 dan 100 kali. Kriteria ketahanan adalah proporsi perkembangan buletin Mycobacterium tuberculosis secara visual. Untuk ubat baris 1, kriteria kelestarian adalah lebihan pertumbuhan 1% daripada populasi awal, untuk ubat barisan ke-2 - pertumbuhan 1 atau lebih daripada 10% daripada permulaan, bergantung kepada kepekatan kritikal yang dipilih.

Pada tahun 1997, kumpulan kerja WHO dan Kesatuan Anti-Tuberkulosis Antarabangsa untuk mengesan rintangan dadah anti-tuberkulosis membuat penyelarasan terhadap kriteria ini, menunjukkan bahawa mikobakteria yang berkembang pada medium telur padat Levenshteyn-Jensen dianggap stabil pada kepekatan berikut:

  • dihydrostreptomycin - 4 μg / ml;
  • isoniazid - 0.2 μg / ml:
  • rifampicin - 40 μg / ml:
  • Ethambutol - 2 μg / ml.

Pada tahun 2001, kepekatan kritikal dicadangkan untuk ubat baris kedua berikut (untuk bahagian kritikal sebanyak 1%):

  • capreomycin - 40 μg / ml;
  • protionamide - 40 μg / ml;
  • kanamycin - 30 μg / ml;
  • viomycin - 30 μg / ml;
  • cycloserine - 40 μg / ml;
  • asid aminosalicylic - 0.5 μg / ml;
  • Ofloxacin - 2 μg / ml.

Keputusan pertumbuhan dinilai selepas 4 minggu sebagai permulaan dan selepas 6 minggu penanaman sebagai muktamad.

Untuk menentukan kepekaan dadah kepada pyrazinamide, yang digunakan secara meluas dalam kemoterapi tuberkulosis moden, kepekatan kritikal yang disyorkan adalah 200 μg / ml. Walau bagaimanapun, masih tiada kaedah umum yang diterima untuk menentukan rintangan dadah terhadap ubat ini pada media nutrien pepejal, kerana aktiviti antibakterianya hanya ditunjukkan dalam medium berasid (pH o C;

  • kekurangan pembentukan pigmen (warna gading);
  • warna asid-tahan;
  • adunan niacin positif;
  • ujian nitrat reduktase positif;
  • ketiadaan katalase termostable (68 o C).
  • kekurangan pertumbuhan alam sekitar Levenshteyn-Jensen, yang mengandungi:
    • 1000 μg / ml natrium salisilat,
    • 500 μg / ml asid paranitrobenzoik,
    • 5% natrium klorida:
  • pertumbuhan dengan kehadiran 1-5 μg / ml asid thiophene-2-carboxylic.
  • Perkaitan pembedahan mikobakteria yang terpencil akan meningkat dengan ketara dengan peningkatan kekerapan pendaftaran kes HIV / AIDS yang berkaitan dengan tuberkulosis atau mycobacteriosis. Pada masa ini, tidak ada kepastian mutlak bahawa makmal serantau praktikal bersedia untuk menjalankan jumlah kerja dengan betul.

    Diagnosis imunologi tuberkulosis

    Terdapat beberapa fenomena sejagat, ubat, dan ujian imunologi yang pada asalnya ditemui semasa tuberkulosis atau pada model tindak balas imun terhadap mikobakteria. Ini termasuk BCG dan tuberculin, fenomena seperti HRT kanser (ujian tuberkulin - tindakbalas Pirke dan Mantoux), tindak balas terhadap ubat pelindung subkutaneus kepada haiwan yang sensitif (fenomena Koch). Antara antibodi pertama dalam penyakit berjangkit juga didapati dalam tuberkulosis. Sudah tentu, pemahaman lebih mendalam mengenai mekanisme imuniti anti-tuberkulosis dan kawalan genetik mereka, lebih luas boleh digunakan dengan kaedah imunologi dan ubat-ubatan yang mempengaruhi sistem imun untuk menyelesaikan masalah praktikal fisiologi.

    Masalah praktikal yang paling penting dan sukar kini dianggap sebagai pengesanan tuberkulosis dalam proses penyaringan massa penduduk. Walau bagaimanapun, walaupun banyak laporan tentang "kejayaan" (mengenai bahan yang terhad), tiada kaedah imunologi yang sesuai (diterbitkan semula dalam "mana-mana tangan") dan penyediaan untuk tujuan ini.

    Kaedah imunologi, khususnya, kajian serologi (penentuan antigen, antibodi) dan ujian provokatif tuberkulin, digunakan secara meluas dalam amalan klinikal.

    Di tempat pertama di kalangan kajian imunologi yang digunakan dalam diagnosis pembezaan, adalah kaedah serologi - definisi antigen dan antibodi dalam media yang berlainan badan.

    Kekhususan penentuan antibodi terhadap mycobacterium tuberculosis bergantung kepada antigen yang digunakan dalam analisis imun. Sebilangan besar antigen telah dicadangkan, yang pertama adalah tuberculin PPD:

    • PPD dan persiapan kompleks lain dari cecair budaya;
    • disintegrat ultrasonik;
    • Ekstrak triton dan persiapan kompleks dinding sel;
    • 5 antigen (Daniel);
    • 60 antigen (Coccito);
    • lipoarabinomannan;
    • faktor kord (trehalose-6,6-di-micolate);
    • fenolik dan glikolipid lain;
    • lipopolysaccharides;
    • antigen mengikat fibronektin;
    • protein (paling sering rekombinan); 81,65,38,34,30,19,18,16,15.12 KDA dan lain-lain.

    Akibat banyak tahun penyelidikan oleh para saintis Rusia dan asing, corak pengeluaran antibodi utama dan keberkesanan diagnosis serologi tuberkulosis telah diturunkan: semakin kompleks antigen, semakin tinggi kepekaan dan menurunkan kekhususan ujian. Kepelbagaian di negara-negara yang berlainan berbeza-beza bergantung kepada jangkitan penduduk M. tuberculosis dan mycobacteria tidak berbisa, mengenai vaksinasi BCG, dan lain-lain. Pada kanak-kanak, informativiti serodiagnosis lebih rendah daripada orang dewasa. Dalam tuberkulosis utama (sering kali kanak-kanak) definisi IgM lebih bermaklumat. dengan menengah - IgG. Dalam maklumat serodiagnostik yang dijangkiti HIV, penentuan antibodi berkurangan. Keberkesanan penentuan antibodi bergantung kepada beberapa "momen klinikal": aktiviti proses (kehadiran atau ketiadaan "pengasingan" mikobakteria, kehadiran rongga, tahap penyusupan), sejauh mana prosesnya, tempoh kursusnya.

    Kepekaan enzim immunoassay (ELISA) adalah kira-kira 70%. Kurangnya keberkesanan kajian ini adalah kerana kekhususannya yang rendah. Sebelum ini, kemungkinan menggunakan saringan serologi dalam kumpulan berisiko tinggi, khususnya di kalangan orang yang mengalami perubahan selepas tuberkulosis dalam paru-paru, telah dipertimbangkan.

    Untuk meningkatkan kekhususan ELISA, pencarian antigen yang lebih spesifik, termasuk yang diperolehi oleh kejuruteraan genetik, terus: ESAT-6 dan lain-lain (lihat di atas). Penggunaan antigen yang ketat (38 kDa, ESAT) meningkatkan kekhususan. tetapi ketara mengurangkan sensitiviti analisis. Bersama dengan ELISA (contoh sistem ujian makmal eksperimen, contohnya kit Pathozyme ELISA), kit immunochromatographic dengan penyaringan sisi (Mycodot), serta ujian lain yang sama (analisis dot pada membran) dengan penilaian visual terhadap hasil kajian telah dicadangkan. Semasa menjalankan ujian ini, analisis dilakukan dalam masa 10-30 minit; mereka tidak memerlukan peralatan khas, memerlukan penilaian visual hasil, yang dikaitkan dengan subjektiviti yang diketahui. Kaedah ini mempunyai kira-kira ciri-ciri kepekaan dan kekhususan yang sama (70% dan 90-93%, masing-masing) sebagai ELISA tradisional.

    Penggunaan kaedah analisis imun mempunyai nilai tertentu sebagai satu tambahan yang diambil kira dalam kompleks kaedah yang digunakan, dalam diagnosis pembezaan tuberkulosis, terutamanya dalam diagnosis bentuk ekstrapulmonarinya. ELISA adalah yang paling berkesan dalam mendiagnosis meningitis tuberkulosis dalam kajian cecair serebrospinal. Dalam kes ini, sensitiviti analisis adalah 80-85%, dan kekhususan adalah 97-98%. Terdapat bukti keberkesanan penentuan antibodi kepada mycobacterium tuberculosis dalam cairan air mata dalam diagnosis uveitis tabung.

    Induksi sintesis gamma-interferon in vitro

    Gamma-interferon (IFN-γ) adalah faktor pertahanan imun yang khusus yang diwujudkan melalui pengaktifan sistem enzim macrophage. Induksi sintesis IFN-γ oleh T-limfosit yang sensitif menyebabkan interaksi dengan antigen mikobakteri.

    Sebagai antigen digunakan sebagai PPD tuberculin. dan antigen spesifik yang diperolehi oleh kejuruteraan genetik, terutamanya antigen ESAT-6 (antigen yang disegani awal dengan jisim molekul 6 kDa) dan CFP-10 (filtrat kultur protein, 10 kDa). Kejuruteraan genetik atau antigen rekombinan tidak hadir dalam sel-sel vaksin BCG dan lain-lain mikobakteria. Apabila menggunakan tuberculin, keputusan ujian induksi IFN-γ dapat dibandingkan dengan keputusan ujian kulit tuberculin (korelasi langsung). Apabila menggunakan antigen rekayasa genetik, keputusan ujian lebih spesifik dan tidak bergantung kepada vaksin BCG terdahulu. Apabila memeriksa individu yang divaksin yang tidak mempunyai hubungan dengan jangkitan tuberkulosis, kekhususan ujian adalah 99%. Kepekaan ujian di kalangan pesakit dengan tuberkulosis adalah antara 81 hingga 89%.

    Ujian dan ujian diagnostik berdasarkan penanaman jangka pendek sel-sel darah utuh atau sel-sel mononuklear yang diasingkan dari darah dengan in vitro Mycobacterium tuberculosis antigens dengan penentuan berikutnya kepekatan IFN-γ atau perhitungan bilangan T-limfosit yang mensintesis IFN-γ telah dibangunkan. Kepekatan interferon disintesis secara in vitro, ditentukan oleh ELISA menggunakan antibodi monoklonal yang mengikat IFN-γ. Kemudian, menggunakan piawaian penentukuran IFN-γ menentukan kepekatannya dalam tiub ujian atau telaga tablet.

    Semasa melakukan ujian Elispot, bilangan T-limfosit yang mensintesiskan IFN-γ. dikira pada permukaan Piala, ditutup dengan antibodi kepada IFN-γ.

    Pemaju diagnostik berdasarkan induksi IFN-γ in vitro, yang telah diluluskan oleh Agensi Dadah dan Produk Amerika Syarikat, berpendapat bahawa menggunakan ujian itu tidak mungkin untuk membedakan jangkitan tuberkulosis laten dari tuberkulosis aktif. Oleh itu, di kawasan yang mempunyai tahap jangkitan yang tinggi, ujian itu tidak mempunyai nilai diagnostik langsung. Walau bagaimanapun, di negara kita, ia boleh digunakan untuk membezakan jangkitan tuberkulosis pada kanak-kanak dari alahan pasca-vaksinasi, serta untuk menilai tahap imuniti tertentu dalam proses rawatan.

    Pada masa ini, sistem ujian domestik untuk menentukan induksi sintesis IFN-γ oleh antigen tuberkulosis tertentu dalam vitro sedang dikaji.

    Status imun dan perjalanan tuberkulosis, ketahanan imun

    Dalam proses merawat tuberkulosis pada manusia, perubahan dalam antigenemia dan keadaan sistem imun berlaku.

    Data mengenai perubahan dalam eksudat dan tisu sebahagian besarnya bercanggah. Satu-satunya perkara yang boleh diperhatikan dengan alasan yang baik adalah bahawa sejumlah besar limfosit T yang aktif biasanya didapati dalam granuloma batuk.

    Adalah wajar untuk mengekalkan dua mata lagi yang perlu untuk memahami peranan mekanisme imunologi dalam rawatan batuk kering pada manusia:

    • Pesakit AIDS mempunyai kejadian rintangan multidrug yang sangat tinggi;
    • dalam kes rintangan multidrug (dan jika tiada jangkitan HIV), imuniti terjejas (terutamanya pautan sel T) amat penting.

    Di dalam tuberkulosis, pelbagai kaedah imunokorreksi digunakan secara meluas: ini adalah terutamanya ubat yang bertindak terutamanya terhadap imuniti sel T dan sistem fagosit mononuklear (hormon thymus, isofon, licopid, polyoxidonium, dan lain-lain). serta mikobakteria keseluruhan (dilemahkan) dan komponennya.

    Diagnosis Biologi Molekul Tuberkulosis

    Kaedah biologi molekular dalam diagnosis penyakit berjangkit terutamanya termasuk kaedah berdasarkan memanipulasi patogen bakteria dan virus dengan bahan genomik untuk mengenal pasti bahan genetik tertentu - segmen DNA dengan urutan nukleotida khusus untuk spesies atau patogen patogen ini, untuk menganalisis spesifik Urutan DNA dalam gen yang menentukan kepekaan patogen kepada bahan ubat tertentu, serta menganalisis fungsi aktiviti flaks gen tertentu patogen. Kaedah biologi molekul digunakan secara meluas dalam penyelidikan saintifik dan aplikasi praktikal dalam diagnosis dan kawalan pelbagai jangkitan bakteria dan virus selepas penemuan pada tahun 1985 dari Kerry Mulllis (pemenang Hadiah Nobel 1989) dari tindak balas rantai polimerase.

    Prinsip dan kemungkinan kaedah tindak balas rantaian polimerase

    PCR membolehkan anda menguatkan (membiak) secara in vitro urutan nukleotida (serpihan DNA patogen) selama beberapa jam berjuta-juta kali. Mengendalikan tindak balas dengan kehadiran helai DNA tunggal menentukan sensitiviti yang sangat tinggi dalam analisis.

    Urutan nukleotida bagi bahagian tertentu dalam rantaian DNA menentukan identiti genetik mikroorganisma, yang menerangkan kekhususan PCR yang tinggi.

    Nilai kaedah ini untuk mengesan dan mengkaji ciri-ciri Mycobacterium tuberculosis adalah disebabkan oleh ciri-ciri biologi mikroorganisma dengan pertumbuhan yang sangat perlahan: masa penggandaan DNA Mycobacterium tuberculosis semasa penanaman mereka ialah 12-24 jam.

    Prinsip kaedah PCR adalah penguatan - berganda, berjuta-juta kali. pendaraban bahagian jujukan DNA tertentu dalam mikrovolume tiub ujian dengan pengulangan kitaran tiga peringkat berikut tindak balas, yang masing-masing berlaku dalam rejim suhu yang berbeza:

    • Peringkat I - denaturasi DNA double-stranded apabila dipanaskan dengan perbezaan rantainya;
    • Tahap II - mengikat pelengkap (hibridisasi) primer (primer oligonucleotides) dengan bahagian akhir rantaian khusus yang dipilih untuk pendaraban fragmen DNA;
    • Tahap III - penyelesaian rangkaian serpihan DNA menggunakan polimerase DNA termostable.

    Untuk penguatan in vitro, mesti terdapat molekul DNA templat. empat jenis deoxynucleoside triphosphates (nukleotida) yang mengandungi asas nitrogenous yang berkaitan: adenine (A), timin (T), guanine (D), sitosin (C); Buatan oligonucleotides (primers) yang disintesis buatan yang terdiri daripada 18-20 pasang asas; enzim polimerase DNA termostable, mempunyai optimum suhu 68-72 o C, dan ion magnesium.

    Kekhususan PCR bergantung kepada pilihan fragmen DNA. Selaras dengan itu, unggas oligonucleotides disintesis. Kekhususan hibridisasi dan penyempurnaan rantai DNA ditentukan oleh prinsip pelengkap pasangan basa nitrogen yang berikut: adenine-thymine, guanine-cytosine.

    Untuk menentukan genom kompleks mycobacterium tuberculosis, sasaran penguatan yang paling berkesan dalam kebanyakan sistem ujian adalah fragmen DNA IS6110, yang kebanyakan strain mycobacterium tuberculosis mempunyai bilangan besar (10-20) ulangan dalam genom, yang menyediakan, bersama dengan spesifikasi, kepekaan tinggi analisis. Pada masa yang sama, strain Mycobacterium tuberculosis dengan sebilangan kecil ulangan atau ketiadaan fragmen IS6110 telah diterangkan.

    Pengasingan molekul DNA dari sampel biologi

    Untuk menjalankan PCR, molekul DNA patogen mesti diasingkan dari bahan biologi dalam jumlah minima, dengan jumlah minimum DNA bukan insisi dan pelbagai inhibitor enzim - polimerase DNA.

    Penyediaan sampel perlu dijalankan di bawah syarat-syarat yang menghalang pencemaran silang sampel yang di bawah kajian oleh molekul DNA yang dirembeskan. Untuk tujuan ini, perlu pretreat bilik dengan cahaya ultraviolet, lantai dan permukaan kerja meja dan peralatan - penyelesaian yang mengandungi klorin. Ia juga perlu menggunakan sarung tangan bersih, tiub boleh guna dan tips untuk pipet automatik.

    Untuk mengasingkan DNA Mycobacterium tuberculosis dari sampel klinikal (cecair cerebrospinal, bronkial lavage) yang tidak mengandungi sejumlah besar leukosit, sisa sel atau garam, ia cukup untuk menumpaskan sampel pada 3-4 ribu revolusi seminit, tambah 20-30 μl penyelesaian 2% ke sedimen triton X-100 dan hangat pada 90 o C selama 30 minit.

    Untuk penyediaan sampel sputum, pencairan berkesan diperlukan, yang biasanya 4% larutan natrium hidroksida dan N-asetil-L-sistein (NALC) dalam jumlah 50-80 mg setiap sampel digunakan, bergantung kepada kelikatan sampel. Penyelesaian NALC mestilah disediakan bekas tempor atau serbuk NALC boleh ditambah dalam bentuk kering terus ke sampel. Selepas pencairan, sampel hendaklah disentrifugasi selama 15 minit pada 3.5-4000 revolusi setiap minit (3000 g) dalam 50 ml tiub dengan topi skru, iaitu. dalam keadaan yang sama yang disyorkan untuk penyediaan pre-sowing sputum.

    Untuk pengekstrakan DNA dari sedimen, kaedah berdasarkan penggunaan 5-6 penyelesaian molar guanidine isothiocyanate sebagai zarah silika dan silika microporous ("bumi diatomaceous") sorbing molekul DNA lebih biasa digunakan. Bahan tidak spesifik, termasuk perencat yang mungkin, kemudian dibasuh dalam penyelesaian 2.5 molar guanidine isothiocyanate dan larutan etanol, selepas itu molekul DNA diserap dalam air, dan sampel-sampel ini digunakan untuk PCR. Untuk mempermudah teknologi pengekstrakan DNA, "bumi diatom" sering diganti dengan mikropartikel magnet yang disalut dengan silika. Pada masa yang sama, bukannya sentrifuging, tabung magnetik khas untuk tiub microtest digunakan untuk mendakan zarah-zarah.

    Di Rusia, kaedah asal pemisahan immobromagnetik mikobakteria telah dibangunkan, diikuti dengan pengekstrakan DNA patogen. Untuk pemisahan immunomagnetic mycobacterium tuberculosis, ferropartikel 3-5 μm dalam saiz digunakan, dilapisi dengan oksida silikon, yang mana antibodi poliklonal (arnab) untuk mikobakteria tuberkulosis dilampirkan oleh ikatan kimia. Selepas lisis alkali, sampel dahak dinetralkan dengan larutan berasid Tris-HCl dan diinkubasi dengan sorben immunomagnetik. Kemudian zarah imunopoli dikumpulkan menggunakan batang magnet dengan hujung diganti, dipindahkan ke mikrovial, dicetuskan. 20-30 μl daripada penyelesaian Triton X-100 2% digunakan dan dipanaskan selama 30 minit pada 90 o C. Supernatan itu digunakan sebagai templat DNA untuk analisis PCR.

    Masalah yang sukar ialah pengasingan DNA Mycobacterium tuberculosis dari spesimen biopsi. Untuk lisis biopsi digunakan enzim - proteinase K pada kepekatan akhir 200-500 mg / l pada suhu 56 o Dengan waktu malam. Seterusnya, peruntukkan salah satu kaedah yang diketahui. Lebihan DNA tidak spesifik dalam analisis PCR spesimen biopsi sering berfungsi untuk menghalang reaksi yang memerlukan pengekstrakan DNA yang berulang.

    Kaedah Pengesanan Keputusan

    Setelah selesai tindak balas, serpihan DNA patogen yang diperkuatkan dikenal pasti menggunakan pelbagai kaedah.

    Kaedah elektroforesis gel yang terkenal. Pada masa yang sama, fragmen DNA yang diperolehi dikenal pasti oleh kawalan positif, mengandungi fragmen DNA spesifik yang diingini, atau dengan saiz yang telah diketahui sebelumnya (bilangan pasangan nukleotida) dari serpihan, yang ditentukan menggunakan penanda molekul piawai.

    Di hadapan pewarna tertentu, etidium bromida, dimasukkan ke dalam DNA double-stranded. Serpihan DNA yang disintesis dikesan sebagai band yang bersinar di bawah tindakan ultraviolet.

    Saiz serpihan DNA, yang ditentukan oleh elektroforesis dengan jarak dari permulaan, mestilah sesuai dengan penanda berat molekul yang diketahui atau kawalan positif.

    Kaedah lain untuk menentukan keputusan PCR adalah berdasarkan hibridisasi produk PCR rantaian tunggal dengan probe DNA bertanda biotin yang melengkapi kepada mereka, diikuti dengan pengesanan oleh reaksi enzim, contohnya, dengan mengikat biotin konjugate streptavidin-alkali fosfatase.

    Berdasarkan jenis pengesanan ini, penganalisis PCR telah dibuat di mana pengesanan keputusan PCR dilakukan secara automatik sebagai hasil daripada membaca kepadatan optik dalam sampel selepas reaksi enzimatik telah berlaku.

    Kelemahan kaedah ini terletak pada kemungkinan pencemaran intralaboratori dengan serpihan molekul DNA yang agak pendek. Molekul-molekul ini, apabila dibebaskan ke dalam sampel yang baru diselidiki, menjadi matriks untuk PCR dan membawa kepada keputusan palsu-positif.

    Dalam hal ini, untuk mengelakkan keputusan palsu, peraturan yang ketat diperkenalkan untuk memisahkan dan mengasingkan premis: untuk mengasingkan DNA dari sampel biologi; premis untuk mengesan hasil (elektroforesis) dari zon bersih. Bilik-bilik ini adalah zon pencemaran yang mungkin. Satu lagi kawasan terpencil adalah ruang yang bersih untuk memperkenalkan sampel ujian DNA ke dalam tiub ujian dengan campuran reaksi untuk PCR. Akhir sekali, diandaikan bahawa peranti utama - penguat DNA - harus dipindahkan ke ruang pejabat yang berasingan, mungkin pejabat.

    Untuk mengelakkan pencemaran dengan produk-produk tindak balas sebelumnya - dengan ampicons, beberapa sistem ujian PCR dan bukan deoxynucleoside thymidine mengandungi deoxynucleosiduride, yang dimasukkan ke dalam kedudukan yang sama semasa sintesis rantai in vitro, iaitu. Timena nitrogenous base, yang terdapat dalam DNA asli, digantikan oleh uracil. Glikosilase DNA Uracil, ditambah kepada campuran tindak balas kepada bahan yang akan dianalisis, memusnahkan hanya serpihan yang mencemari dengan deoxyuridine, tetapi bukan DNA dianalisis asli. mengandungi deoxythymidine. Pemanasan seterusnya pada 94 o C tidak mengaktifkan enzim ini dan tidak mengganggu penguatan PCR.

    Terdapat sistem ujian berdasarkan amplifikasi isoterma rRNA, yang mana transkripsi dan sintesis molekul DNA terbalik dijalankan terlebih dahulu. yang, pada gilirannya, merupakan templat untuk sintesis berikutnya RNA molekul. Konspirasi RNA dikesan menggunakan probe DNA berwarna acridine semasa hibridisasi dalam penyelesaian tiub tindak balas. Kaedah ini, sebagai tambahan kepada kepekaan yang tinggi, mempunyai kelebihan melakukan analisis dalam satu tiub ujian, yang menghalang pencemaran. Menurut penulis, sensitiviti kaedah ini dalam sampel pernafasan mencapai 90% dengan kekhususan 99-100%.

    Kaedah pengesanan baru dilaksanakan dalam PCR masa nyata. Kaedah ini dibezakan terutamanya oleh fakta bahawa PCR dan pengesanan keputusannya dilakukan serentak dalam satu tiub tertutup. Ini bukan sahaja mempermudah kaedah analisis teknologi, tetapi juga menghalang pencemaran bilik makmal dan sampel ujian dengan produk sebelum PCR.

    Dalam PCR masa nyata, pengesanan keputusan berlaku disebabkan oleh pendarfluor yang timbul daripada hibridisasi penyelidikan DNA fluorogenik dengan serpihan DNA spesifik yang diperkuat semasa PCR. Struktur probe DNA fluorogenik dibina sedemikian rupa sehingga penanda pendarfluor dilepaskan sebagai hasil daripada tindak balas enzimatik atau menjauhkan diri dari molekul pendarfluor pendarfluor hanya semasa hibridisasi spesifik dengan molekul DNA yang dikehendaki diperkuat semasa PCR. Dengan peningkatan bilangan molekul yang hibridisasi dengan siasatan, peningkatan pendarfluor ke tahap yang dikesan adalah berkadar dengan bilangan molekul produk yang diperkuatkan. Oleh kerana bilangan molekul serpihan DNA meningkat dua kali ganda pada setiap kitaran PCR, bilangan kitaran yang mana pendaraban ditentukan dan meningkat berkadar sebanding dengan bilangan molekul DNA dalam sampel asal. Sekiranya terdapat kepekatan molekul yang berbeza dari serpihan DNA yang sepadan dengan Mycobacterium tuberculosis diperkenalkan ke dalam tindak balas sebagai penimbang, maka genom DNA dalam bahan di bawah kajian boleh dikira dengan menggunakan program komputer.

    Setiap sampel standard diduplikasi. Kriteria kuantitatif adalah bilangan minimum kitaran PCR yang diperlukan untuk permulaan dan pertumbuhan pendarfluasan yang dikesan. Abscissa adalah bilangan siklus; paksi ordinat adalah nilai pendarfluor. Kepekatan DNA berkadar songsang dengan bilangan kitaran yang diperlukan untuk penampilan pendarfluor. Di tingkap pada lajur kanan (21-32) nombor kitaran untuk kepekatan masing-masing ditandakan. Perbezaan antara kepekatan 10 kali ganda serpihan DNA 10 2 -10 6 ml - 3.2-3.4 kitaran. Bagi dua pesakit, kepekatan kepingan IS6110 adalah kira-kira 10 3 / ml dan 10 4 / ml. Mengambil kira bilangan ulangan (6-20) daripada serpihan yang dianalisis dalam genom Mycobacterium tuberculosis, jumlah mikobakteria dalam spesimen klinikal adalah kira-kira 100 dan 1000 sel.

    Penggunaan PCR dalam diagnosis tuberkulosis

    Kaedah PCR paling banyak digunakan untuk diagnosis dipercepatkan tuberkulosis - pengesanan mycobacterium tuberculosis dalam spesimen klinikal: dahak. pembasuhan bronkial, exudate pleura, air kencing, cecair serebrospinal, punca osteolisis, aspirat saluran kemaluan wanita dan pelbagai spesimen biopsi. Dalam satu kajian di Holland, kira-kira 500 spesimen sputum dan bronkial swabs dari 340 pesakit dengan diagnosis disahkan tuberkulosis pulmonari, kepekaan komparatif PCR, kultur dan mikroskopi smear dikaji. Kepekaan analisis masing-masing adalah 92.6.88.9 dan 52.4%. Dalam kes ini, kekhasan semua kaedah adalah kira-kira 99%.

    Perbandingan dibuat dari kecekapan pengesanan mycobacterium tuberculosis dengan kaedah mikroskopi smear, pembenihan pada medium Lowenstein-Jensen, sistem ujian WASTES dan analisis PCR. PCR menunjukkan sensitiviti sebanyak 74.4%, mikroskopi - 33.8%, pembajaan pada medium padat - 48.9% dan WASTES - 55.8%. Masa pengesanan purata untuk penanaman pada medium Levenshtein-Jensen adalah 24 hari. WASTES - 13 hari, PCR - 1 hari.

    Kemungkinan menggunakan PCR sebagai kaedah sensitif dan cepat untuk memantau keberkesanan rawatan untuk batuk kering juga dibincangkan.

    Pengesanan Mycobacterium tuberculosis DNA oleh PCR dengan kemoterapi berkesan ditentukan untuk masa yang lebih lama - purata 1.7 bulan berbanding dengan rembesan bakteria yang dikesan oleh mikroskopi pendarfluor, dan 2.5 bulan berbanding dengan ujian bakiologi.

    Diagnosis tuberkulosis extrapulmonary

    Nilai PCR sebagai kaedah sensitif sangat baik untuk bentuk ekstrapulmonari, kerana dalam bentuk ini kaedah x-ray klinikal dan kaedah bakteriologi tradisional untuk menentukan mycobacterium tuberculosis dalam bahan diagnostik tidak berkesan.

    Apabila memeriksa sampel air kencing, keputusan analisis PCR positif di 16 daripada 17 pesakit dengan tuberkulosis aktif sistem kencing dan negatif dalam 4 pesakit dengan tuberkulosis ginjal yang tidak aktif dan 39 pesakit dengan penyakit tidak berstatus sistem kencing.

    Kecekapan analisis PCR ditunjukkan dalam kajian aspirasi sumsum tulang pada pesakit yang mempunyai demam yang tidak jelas kerana disyaki sifat tuberkulosis penyakit. Untuk diagnosis limfadenitis tabiat pada kanak-kanak, 102 aspirat tusukan dan spesimen biopsi 67 kanak-kanak yang disyaki limfadenitis tabiat telah dikaji. Hasil positif diperolehi: oleh PCR masa sebenar - 71.6%. mikroskop pendarfluor - 46.3%. kajian budaya - 41.8%. Dalam satu kajian pada 50 biopsi nodus limfa pada pesakit dengan penyakit gatal kucing, semua keputusan adalah negatif. Oleh itu, spesifik 100% analisis PCR ditunjukkan. Dalam kerja yang sama, dengan biopsi tusukan nodus limfa, kemungkinan mengesan M. avium ditunjukkan.

    Diagnosis tuberkulosis genital wanita dengan ketidaksuburan diketahui sebagai salah satu masalah diagnostik yang paling sukar. Satu kajian menggunakan PCR biopsi endometrium, aspirat endometrium, dan sampel cecair dari ruang Douglas dalam 14 (56%) daripada 25 pesakit yang diperiksa laparoskopi dengan suspek tuberkulosis, menunjukkan keputusan yang positif. Menggunakan mikroskopi dan kajian kultur smear, 1 dan 2 diperoleh, masing-masing, keputusan positif. Kes-kes ini juga positif PCR. Kebanyakan keputusan PCR-positif yang berkaitan dengan kes-kes yang mempunyai tanda-tanda ciri tuberkulosis mengikut pemeriksaan histologi; jumlah yang lebih kecil - dalam kes yang disyaki batuk kering mengikut laparoskopi. Hanya satu analisis PCR positif yang diperolehi dengan ketiadaan data laparoskopi untuk tuberkulosis.

    Apabila mendiagnosis bentuk tuberkulosis ekstrapulmonary, klinik sering mempunyai persoalan tentang kemungkinan mengesan patogen dalam kajian PCR sampel darah. Data kesusasteraan menunjukkan bahawa pengesanan DNA Mycobacterium tuberculosis dari sampel darah adalah mungkin dengan jangkitan jangkitan HIV. Mycobacterium tuberculosis DNA dikesan hanya dalam kes tuberculosis umum pelbagai organ pada pesakit dengan buah pinggang dan imunosuppression yang dipindahkan.

    Pengenalpastian spesies mikobakteria

    Kaedah PCR boleh menjadi sangat berkesan untuk pengenalan pesakit kompleks mycobacterium tuberculosis dan beberapa jenis mycobacteria tidak berbisa selepas pertumbuhan awalnya. Dalam kes ini, penggunaan PCR boleh menjimatkan 7-10 hari yang diperlukan untuk pengenalan kebudayaan berikutnya hasil positif. Penyelidikan oleh PCR secara teknikalnya sangat mudah, kerana ia tidak memerlukan penyediaan sampel kompleks bahan klinikal untuk mencapai kepekaan yang tinggi. Dalam kajian 80 budaya positif dalam sistem ujian seperti ini (MB VasT Dari firmon firm) semua keputusan positif analisis PCR adalah khusus dan dijalankan selama 1 hari. Untuk mengenal pasti jenis mikobakteria yang lain, apabila ia diperoleh dalam budaya, DNA patogen hibridisasi dengan probe DNA tertentu yang dilabel dengan acridine, dan strain dikesan dengan kemunculan chemiluminescence menggunakan chemiluminometer atau pada jalur nitrocellulose dengan penilaian visual selepas hibridisasi. Dengan kit ini, bilangan spesies terhad dikenalpasti: kompleks Mycobacterium tuberculosis. M. avium, M. avium complex, M. kansasii dan M. gordonae.

    A.Telenti et al. mereka juga membangunkan kaedah yang agak mudah dan murah untuk pengenalpastian spesies mikobakteria penting klinikal berdasarkan PCR dan pemprosesan seterusnya dengan dua enzim sekatan (enzim yang mempunyai sifat untuk memotong molekul DNA pada titik tertentu). Apabila ini diperkuat, serpihan DNA. pengekodan protein kejutan haba (65 kDa), selepas itu fragmen DNA 439 pasangan nukleotida yang diperoleh oleh PCR diproses secara berasingan oleh dua enzim - Bste II dan Hae III. Kemudian, menggunakan elektroforesis gel agarose, kedua-dua produk yang diperoleh dianalisis, menentukan saiz mereka (bilangan pasangan nukleotida) dengan menggunakan satu set serpihan DNA standard (penanda DNA molekul) dengan panjang dari 100 hingga 1000 pasangan nukleotida. Dalam setiap spesies tertentu (M. tuberculosis, M. avium, M. intracellulare, M. kansasii, M. fortuitum), 2 atau 3 serpihan DNA pelbagai saiz didapati untuk setiap enzim sekatan. Gabungan serpihan DNA berukuran yang berbeza yang diperoleh membolehkan perbezaan spesies ini di kalangan mereka.

    Teknologi microchip DNA biologi sedang dibangunkan. yang akan membantu mengenal pasti lebih daripada 100 jenis mikobakteria dalam satu kajian.

    Pengenalpastian spesies juga boleh dilakukan dengan menggunakan penguatan PCR bagi rantau pembolehubah rRNA 16S, diikuti dengan penjujukan amalan apabila dibandingkan dengan struktur utama yang sepadan, yang membolehkan pengenalpastian lebih daripada 40 spesis mikobakteria.

    Menggunakan PCR, pengenalan spesies juga boleh dilakukan dalam kompleks mycobacterium tuberculosis, termasuk pembezaan M. bovis dan M. bovis BCG. Untuk ini, kehadiran atau ketiadaan gen tertentu dalam kawasan genom RD1 dianalisis. RD9 dan RD10. RD1 tidak hadir dalam M. bovis BCG, tetapi terdapat dalam spesies yang ganas, termasuk M. bovis.

    Penentuan kecenderungan ubat Mycobacterium tuberculosis menggunakan PCR

    Tugas kaedah genetik molekul untuk menentukan kerentanan dadah atau rintangan Mycobacterium tuberculosis dikurangkan kepada pengenalan mutasi dalam urutan nukleotida gen yang diketahui. Kaedah utama didasarkan pada pembacaan langsung (penjujukan) urutan ini selepas amplifikasi, atau pada hibridisasi fragmen DNA berlabel biotin yang diperkuat semasa PCR dengan probe DNA. Kedua-dua varian mencadangkan pengenalpastian penggantian dalam urutan nukleotida yang, apabila menggunakan probe DNA, membawa kepada ketiadaan atau hibridisasi yang cacat pada membran nitroselulosa menggunakan konjugat enzim (streptavidin-alkali fosfatase) - kaedah LIPA-Rif-TB.

    Kaedah mengukur pendarfluor dalam probe DNA yang ditetapkan secara persendirian di kawasan mikro yang melengkapi mutasi yang diketahui di kawasan gen yang diperkayakan PCR yang bertanggungjawab terhadap kepekaan dadah atau rintangan dipanggil kaedah microbiochip. Algoritma asas untuk menjalankan kajian ini adalah seperti berikut. Setelah mengasingkan DNA dari sampel klinikal atau budaya mycobacteria, adalah perlu untuk menjalankan PCR untuk menguatkan serpihan yang sepadan gen gRV yang bertanggungjawab terhadap kepekaan dadah kepada rifampicin, atau gen katG dan inhA yang mengodkan protein mikobakteria yang bertanggungjawab terhadap kepekaan isoniazid. Hasil PCR dinilai dengan menggunakan elektroforesis gel agarosa, yang mengesahkan penyediaan serpihan DNA yang sepadan dengan panjang yang diinginkan. Ini diikuti oleh pusingan ke-2 PCR untuk pengenalan label neon ke dalam DNA. Keputusan PCR sekali lagi disahkan oleh elektroforesis gel. Selepas itu, hibridisasi (inkubasi semalaman) dilakukan diikuti dengan membasuh bahan yang diperolehi pada biochip, yang merupakan sejumlah besar rangkaian rantai DNA pendek (probe) yang dipasang pada plat kaca kecil, yang melengkapi urutan rangkaian nukleotida Mycobacterium tuberculosis yang sensitif pada titik-titik mutasi yang mungkin. serta urutan mutan yang bertanggungjawab terhadap rintangan dadah. Penyusunan probe DNA pada plat ditentukan dengan tegas, dan tahap pendarfasan yang diamati semasa hibridisasi untuk menentukan hasilnya menggunakan pembaca khas ditetapkan. Dalam hal ini, hasil analisa ditentukan dengan menggunakan program komputer khas.

    Dalam tahun-tahun kebelakangan ini, kaedah alternatif untuk menentukan kerentanan ubat Mycobacterium tuberculosis berdasarkan teknologi PCR masa nyata telah dibangunkan, membolehkan kajian-kajian ini dijalankan dalam mod tiub tertutup.

    Dalam ara. 13-13 mempersembahkan hasil analisis budaya klinikal Mycobacterium tuberculosis apabila menentukan rintangan dadah untuk rifampicin menggunakan PCR masa nyata: 218 - sampel kawalan (sensitif terhadap rifampicin); 93 - kawalan positif untuk mutasi Ser-Trp TCG-TGG; 4482 - kawalan positif untuk mutasi TCG-TTG Ser-Leu; 162-322 - sampel eksperimen. Hasil pengiraan kurva penguatan kinetik untuk 4 saluran: saluran 1: 393 - kawalan positif untuk mutasi TCG-TGG Ser-Trp; saluran 2: 4482 - kawalan positif untuk mutasi TCG-TTG Ser-Leu; 162, 163, 172, 295 - sampel percubaan; saluran 4: keluk penguatan kinetik semua sampel yang terlibat dalam eksperimen. Tindak balas penguatan kawalan positif. Kesimpulan: hasil analisis menunjukkan mutasi berikut yang menentukan rintangan terhadap rifampicin: dalam sampel 162,163,172,295 - Ser-Leu TCG-TTG. Prinsip yang sama digunakan untuk menentukan rintangan dadah pada isoniazid untuk gen katG dan inhA, yang menentukan mutasi yang paling kerap.

    Pengenalan strain mycobacterium tuberculosis

    Kaedah pengenalan terikan Mycobacterium tuberculosis adalah teknologi yang dikenali sebagai polimorfisme panjang pecahan (RFLP, atau RFLP dalam versi bahasa Inggeris) dan yang berdasarkan fragmen DNA yang membahayakan Mycobacterium tuberculosis dengan enzim Pvu II dan hibridasi selanjutnya dari serpihan yang diperolehi dengan urutan spesifik pada DNA elemen pengulangannya adalah IS6110. Variabilitas intraspecifik direalisasikan kerana bilangan ulangan IS6110 yang berlainan dan lokasi mereka pada DNA. serta kepelbagaian jarak antara titik-titik tertentu serangan sekatan enzim (sekatan tapak) dan unsur IS6110. Teknologi ini sangat rumit dan memakan masa. Selepas memproses DNA yang diasingkan dari kultur Mycobacterium tuberculosis dengan enzim sekatan, elektroforesis gel dijalankan, maka serpihan DNA pelbagai panjang dipindahkan ke membran nitrocellulose, hibridisasi dengan serpihan IS6110, dan hasilnya dikesan menggunakan reaksi enzim. Corak khas band yang dihasilkan mencirikan DNA dari ketegangan tertentu Mycobacterium tuberculosis. Menggunakan analisis komputer mendedahkan identiti atau afiniti strain. Walaupun kaedah RFLP adalah yang paling diskriminatif, iaitu mendedahkan bilangan terbesar perbezaan dalam strain dianalisis; ia tidak berkesan dengan bilangan kecil (kurang daripada 5) ulangan IS6110 yang diamati dalam beberapa strain. Dalam ara. 13-14 membentangkan hasil menaip RFLP strain.

    Alternatif mungkin adalah kaedah spoligotip (spoligotyping) -an analisis polimorfisme urutan spacer DNA - perantaraan antara ulangan langsung rantau DR. Apabila menjalankan spoligotiping strain, PCR dilakukan dengan primers yang mengehadkan kawasan DR, selepas mana serpihan pelbagai panjang terbentuk, yang menghiburkan dengan kawasan perantaraan yang berubah-ubah DNA. Analisis urutan spacer rantau DR dibentangkan. menurut penyelidik, lebih mudah, lebih produktif dan sesuai untuk penyaringan strain utama dan analisis epidemiologi awal, serta kajian bahan klinikal secara langsung.

    Jelas sekali, kaedah yang lebih cekap dan teknologi yang boleh diakses adalah VNTR (singkatan perkataan bahasa Inggeris), atau kaedah untuk menentukan bilangan pemboleh ubah yang tepat diulangi dalam DNA Mycobacterium tuberculosis. Kaedah ini hanya berdasarkan penggunaan PCR dan tidak memerlukan manipulasi tambahan. Oleh kerana bilangan tandem berulang dalam strain yang berbeza dan dalam lokus yang berlainan adalah berbeza, serpihan pelbagai saiz ditentukan dan dianalisis pada elektroforegram produk PCR yang terhasil. Menurut para penyelidik, tahap diskriminasi strain yang lebih besar dicapai dengan bantuan VNTR daripada dengan kaedah RFLP.

    Dalam tahun-tahun kebelakangan ini, banyak perhatian telah diberikan kepada penyebaran strain Mycobacterium tuberculosis keluarga W-Beijing (kadang-kadang mereka dipanggil ketegangan Beijing), yang sebahagian besarnya tahan dadah.

    Keperluan asas untuk kualiti kajian biologi molekul

    Dokumen peraturan asas untuk PCR

    Perintah Kementerian Kesihatan Rusia: No. 45 bertarikh 7 Februari 2000. No. 109 bertarikh 21 Mac 2003. No. 64 bertarikh 21 Februari 2000. Garis panduan metodologi: 1.3.1888-04 "Organisasi kerja semasa kajian PCR mengenai bahan yang dijangkiti dengan biologi patogen ejen kumpulan patogenik III-IV "; 1.3.1794-03 "Organisasi kerja semasa kajian PCR mengenai bahan yang dijangkiti mikroorganisma kumpulan patogenisitas I-II". 2003; 3.5.5.1034-01 "Pembasmian bahan ujian yang dijangkiti bakteria kumpulan patogenikitas I-IV apabila menggunakan kaedah PCR", 2001. Lampiran 11 kepada Arahan mengenai kaedah bersatu penyelidikan mikrobiologi dalam pengesanan, diagnosis dan rawatan tuberkulosis.

    Kakitangannya

    Doktor diagnostik makmal klinikal, pakar bakterologi, virologis, ahli biologi makmal diagnostik klinikal, serta pakar dengan pendidikan perubatan menengah yang telah lulus pengkhususan dan latihan lanjutan mengikut cara yang ditetapkan boleh menjalankan kajian biologi molekul.

    Makmal premis peranti

    Kemudahan makmal yang berikut diperlukan:

    • Kawasan pemprosesan sampel adalah makmal yang disesuaikan untuk bekerja dengan agen berjangkit kumpulan III-IV patogenik, mengikut garis panduan Metodologi 13.1888-04.
    • Zon untuk penyediaan campuran reaksi PCR - ruang makmal, yang memberikan perlindungan terhadap pencemaran makmal dalaman - zon "bersih".
    • • Jika elektroforesis atau hibridisasi digunakan untuk menganalisis produk PCR. ruang makmal di mana serpihan DNA yang diagihkan diekstrak dari tiub amplifikasi dan, dengan itu, boleh dilepaskan ke alam sekitar, mengikut keperluan untuk makmal PCR (Garis Panduan 1.3.1794-03, Garis Panduan 1.3.1888-04) mestilah sepenuhnya terpencil dari premis yang dinyatakan dalam perenggan yang terdahulu. Pergerakan dari zon elektroforesis ke zon pemprosesan sampel dan zon "bersih" mana-mana personel, peralatan, apa-apa bahan dan objek, serta pemindahan udara melalui sistem pengudaraan atau akibat draf hendaklah dikecualikan. Zon ini tidak diperlukan untuk pengesanan fluorimetrik produk PCR.
    • Bilik untuk dokumentasi dan pemprosesan keputusan dilengkapi dengan komputer dan peralatan pejabat yang diperlukan. Peralatan boleh terletak di dalam bilik ini untuk mengesan produk PCR tanpa membuka tiub. - Pengesan PCR fluorescent dan thermocycler untuk PCR masa nyata.

    Keperluan kebersihan dan epidemiologi untuk rawatan utama sputum adalah serupa dengan keperluan mikrobiologi standard untuk bekerja dengan mikobakteria tuberkulosis.

    Set lengkap peralatan makmal untuk diagnostik PCR

    Pakej makmal termasuk peralatan untuk bilik-bilik berikut.

    • Bilik penyediaan sampel mengandungi peralatan berikut: kelas perlindungan laminar II "SP-1.2": termostat keadaan pepejal dengan tudung yang dipanaskan untuk tiub jenis Eppendorf; microcentrifuge pada 13,000 rpm; centrifuge ("Vortex"); peti sejuk dengan julat suhu dari -20 ° C hingga +10 ° C; pipet volum berubah-ubah dari siri Proline; pam dengan perangkap flask OM-1; pipette stand; tempat kerja tripod 200x0,5 ml; tempat kerja tripod 50x1.5 ml; rak untuk tiub penyimpanan 80x1.5 ml;
    • ruang untuk penyediaan campuran reaksi: ruang perlindungan PCR-box ("Laminar-C. 110 cm); centrifuge - "Vortex"; pipet volum berubah-ubah dari siri Profesional; pipette stand; tripod tempat kerja 200x0.2 ml; rak untuk tiub penyimpanan 80x1.5 ml; peti sejuk dengan julat suhu -20 o C hingga + 10 o C;
    • ruang elektroforesis: ruang untuk elektroforesis mendatar; bekalan kuasa; transilluminator;
    • Penguat DNA atau penganalisis asid nukleik (PCR masa nyata) dengan komputer dan perisian; boleh diletakkan di mana-mana bilik percuma. Jika menggunakan teknologi PCR dalam masa nyata. Bilik elektroforesis tidak diperlukan.

    Kawalan kualiti luaran

    Untuk keyakinan untuk mendapatkan hasil yang boleh dipercayai secara objektif, makmal harus mengambil bahagian dalam sistem penilaian kualiti luaran penyelidikan makmal.

    Peserta dalam sistem kawalan kualiti menerima; 12 ampul dengan penggantungan lyophilized sel bakteria, yang mengandungi E. coli E. coli, 3 ampul dengan mycobacterium tuberculosis (strain avirulent) pada kepekatan 10 2 / ml; 3 ampul dengan sel-sel strain yang sama pada kepekatan 10 4 / ml; 2 ampul dengan mikobakteria yang tidak berbahaya M. avium-intracellulare dan M. kansasii pada kepekatan 10 5 / ml.

    Ujian yang diagihkan untuk penilaian kualiti luaran adalah pra-uji di dua makmal bebas dengan pengalaman yang luas dalam bidang ini.