Diagnosis tuberkulosis PCR

Tuberkulosis adalah jangkitan tertentu, tumpuannya mungkin dalam tisu manusia selama bertahun-tahun, dan kemudian menyebar selama beberapa bulan. Ini adalah penyakit kronik yang rejimen rawatan yang optimum sukar diperoleh. Salah satu sebab untuk ini ialah diagnosis lewat, apabila mycobacteria, sementara di tubuh manusia, telah disesuaikan dengan banyak ubat.

Apakah diagnosis kaedah moden apa? Diagnostik PCR - apa itu? Bagaimana kajian ini dilakukan? Dalam kes yang mana tuberkulosis didiagnosis dengan kaedah ini dan apakah intipatinya?

Apakah diagnosis PCR?

Ini adalah salah satu kaedah yang paling moden untuk mendiagnosis bukan sahaja penyakit, tetapi juga pengesanan bahan biologi. Diagnosis PCR dicipta baru-baru ini. Sekitar 30 tahun yang lalu pada tahun 1983, seorang biokimia Amerika, Carey Banks Mullis, mencadangkan skim pemulihan kompleks untuk bahan biologi mikroorganisma dalam satu segmen pendek. Terima kasih kepada penemuannya, saintis itu dianugerahkan anugerah tertinggi - Hadiah Nobel.

Apakah itu - diagnosis PCR jangkitan? Reaksi rantai polimerase (PCR) adalah diagnosis pengesanan penyakit virus, berdasarkan kaedah kejuruteraan genetik. Ia digunakan secara meluas dalam mikrobiologi perubatan, imunologi dan virologi. Kaedah ini universal dan membantu membuat diagnosis dengan sedikit bahan. Kenal pasti jangkitan boleh secara harfiah dalam jangkamasa pertama jangkitan dengannya, jauh sebelum gejala pertama penyakit muncul.

Kaedah ini terdiri daripada mendapatkan dari bahan dari orang yang sakit bukan patogen itu sendiri, tetapi serpihan genom (zarah DNA), biosintesisnya dengan penentuan berikutnya yang mana kelas mikroorganisma bahan genetik yang diperoleh tergolong melalui kaedah genetik molekul.

Walaupun ia adalah proses yang kompleks, ia mengambil masa yang lebih sedikit daripada banyak kaedah biologi mengesan agen berjangkit. Dalam masa beberapa jam, mikroorganisma boleh dikesan oleh PCR. Untuk melakukan ini, tidak perlu mengasingkannya dari persekitaran (darah, cecair cerebrospinal, dahak) dan membesar untuk masa yang lama pada media nutrien tiruan. Adalah cukup bahawa serpihan kecil sehelai DNA agen berjangkit hadir dalam bahan yang sedang dipelajari.

Asas tindak balas adalah kemungkinan di bawah keadaan buatan (in vitro) untuk menghasilkan sintesis molekul asid nukleus ejen berjangkit.

Apa yang diperlukan untuk PCR?

  1. Primer adalah segmen DNA yang mana biosintesis atau penciptaan bermula.
  2. Nukleotida atau sebatian kompleks yang menjadi asas kepada molekul DNA atau RNA.
  3. Reaksi rantai polimerase tidak mungkin tanpa adanya polimerase, yang merupakan enzim yang mempercepat PCR.

Tahap diagnostik PCR

Bagaimana diagnosis molekul dilakukan oleh PCR? Prosedur ini mudah dan mengambil masa yang singkat, dengan mengambil kira pengumpulan bahan.

  1. Sebelum memulakan kajian, ambil bahan biologi yang diperlukan - ini adalah air basuh bronkial, darah, kandungan lambung, dan dahak. Jenis bahan biologi bergantung kepada patogen yang disyaki.
  2. Denaturasi atau pemusnahan struktur utama DNA, yang terdiri daripada dua rantai. Intipati tahap ini adalah untuk memisahkan kedua-dua litar di bawah pengaruh suhu tinggi (maksimum adalah 98 ºC, yang tidak berlangsung lebih dari dua minit).
  3. Di peringkat seterusnya PCR, dipanggil penyepuhlindapan, suhu dikurangkan dengan beberapa darjah sehingga primer akan terikat pada helai DNA.
  4. Pemanjangan, di mana sintesis molekul yang dikehendaki berlaku secara langsung.

Akibatnya, hanya 25-30 kitaran sedemikian menerima bilangan salinan DNA mikroorganisma yang diperlukan, yang mudah dikenali.

Adakah PCR memerlukan diagnosis tuberkulosis?

Tidak mungkin benar-benar semua orang yang disyaki menggunakan tuberkulosis untuk melakukan PCR, kerana kaedahnya memerlukan peralatan mahal. Tidak semua klinik awam mampu membelinya. Di samping itu, ia berlaku bahawa kaedah biasa mendiagnosis jangkitan dalam kebanyakan kes juga membenarkan diri mereka sendiri.

Ini termasuk:

  • tinjauan pesakit, pengambilan sejarah;
  • pemeriksaan penuh orang itu;
  • penyelidikan menggunakan ujian tuberculin Mantoux;
  • X-ray atau fluorografi
  • diagnostik komputer jika perlu;
  • Kaedah penyelidikan mikrobiologi: mikroskopi smear dan pemeriksaan bacteriological dahak.

PCR untuk tuberkulosis dilakukan dalam kes-kes khas apabila sukar untuk membuat diagnosis atau tidak mungkin untuk menjalankan kaedah instrumental lain.

Walaupun terdapat banyak kaedah diagnostik, kejadian tuberkulosis terus berkembang. Pada masa ini, tidak hanya pertumbuhannya, tetapi juga ciri-ciri lain:

  • penyakit ini sering berlaku dalam bentuk yang teruk;
  • bilangan kes maut meningkat;
  • semakin tahan terhadap ubat kemoterapi moden yang didiagnosis.

Kehadiran rakyat sendiri menjalani pemeriksaan kesihatan rutin setiap tahun, penolakan vaksinasi menyebabkan penyebaran tuberkulosis. Dalam keadaan sedemikian, kaedah penyelidikan cepat, bermaklumat dan berkesan diperlukan, yang harus diakses oleh kanak-kanak dan orang dewasa. Semua kaedah diagnostik di atas adalah lebih rendah daripada PCR.

Faedah mendiagnosis batuk kering dengan PCR

Penyelidikan ini, walaupun baru, telah terbukti dengan baik, terutamanya dalam kes-kes kontroversi di mana ia tidak mungkin membuat diagnosis untuk beberapa sebab.

Terima kasih kepada PCR, lebih mudah untuk mengesan agen penyebab tuberkulosis dalam bahan ujian.

Kelebihan diagnostik PCR adalah seperti berikut.

  1. Ini adalah analisis cepat. Serpihan kecil molekul DNA dapat digunakan untuk mendiagnosis hanya dalam beberapa jam (sekitar lima), yang berhasil digunakan dalam situasi kecemasan ketika, misalnya, sebelum operasi diperlukan untuk menentukan apakah seseorang sakit tuberkulosis.
  2. Analisis PCR dibenarkan dalam kes apabila kaedah lain tidak tersedia atau dilarang (untuk mengesan tuberkulosis pulmonari, kadang-kadang perlu mengambil beberapa gambar radiografi, yang akan membuat dos radiasi yang besar).
  3. Dengan bantuan PCR, sebarang persekitaran biologi diperiksa untuk kehadiran patogen di dalamnya. Sebagai contoh, anda boleh menjalankan kajian cecair serebrospinal, jika ada suspek meningitis tuberkulosis.
  4. Mengizinkan diagnosis PCR penyakit berjangkit pada kanak-kanak, kerana kaedahnya selamat.
  5. Membolehkan anda mengenal pasti patogen di mana-mana peringkat penyakit ini.
  6. Kepekaan tinggi PCR memungkinkan untuk mengesan Mycobacterium tuberculosis, walaupun terdapat hanya beberapa mikroorganisma dalam bahan biologi.
  7. Adalah baik untuk menjalankan diagnosis penyakit berulang.

Selepas semua PCR yang dibaca seolah-olah kaedah diagnostik yang hampir sempurna, yang harus dilakukan kepada semua orang dengan kecurigaan tuberkulosis. Tetapi ada juga kekurangan di sini, mereka mesti dipertimbangkan.

Kelemahan PCR dalam diagnosis tuberkulosis

Di zaman kita, diagnostik sedemikian lebih jarang daripada keteraturan. Dan untuk ini ada alasan.

  1. Ini adalah kaedah penyelidikan yang mahal. Di banyak klinik, peralatan untuk PCR tidak hadir kerana kos yang tinggi, tetapi analisis masih boleh dilakukan di makmal berbayar.
  2. Sejurus selepas rawatan, mycobacteria mati atau hidup dalam kuantiti yang kecil mungkin masih terdapat di dalam tubuh manusia (hasilnya akan positif semasa diagnosis PCR), jadi kaedah ini tidak tepat pada masa ini, tidak masuk akal untuk melaksanakannya.
  3. Mutasi mikobakteria mengakibatkan PCR tidak berkesan - urutan serai DNA biasa tidak dapat disintesis.
  4. Ia adalah perlu untuk memilih persekitaran yang sesuai untuk kajian ini, darah diambil hanya jika ia disyaki dijangkiti (sepsis), tidak ada keperluan untuk mengambil ubat jika ada masalah tuberkulosis organ-organ sistem saraf. Dalam kes ini, PCR tidak dapat mengesan patogen dan diagnosis akan menjadi tidak diketahui.

Petunjuk untuk pengesanan tuberkulosis menggunakan analisis PCR

Diagnostik PCR tuberkulosis dijalankan paling kerap dalam kes kontroversi. Bilakah doktor merujuk kajian ini?

  1. Sekiranya sukar untuk membuat diagnosis menggunakan kaedah yang sedia ada, tetapi ada hubungan dengan tuberkulosis yang sakit.
  2. Sekiranya tidak mustahil untuk menghantar orang ke poliklinik untuk peperiksaan rutin rutin untuk tuberkulosis, lebih mudah untuk memeriksa dia menggunakan PCR, kerana pemeriksaan dahaga boleh dihantar ke dalam balang dan diagnosis disahkan dalam beberapa jam.
  3. Jika seseorang akan menjalani operasi kecemasan dan anda perlu segera mengetahui sama ada dia mempunyai tuberkulosis.
  4. Sekiranya perlu, wanita hamil juga lebih baik untuk menyaring tuberkulosis menggunakan PCR, kerana kaedahnya selamat.
  5. Secara berbayar, sesiapa yang tidak mengesahkan tuberkulosis dengan kaedah bacteriological dan fluoroscopy boleh menjalani diagnosis. Ini berlaku apabila luka di paru-paru tidak dapat dilihat dalam imej langsung, dan orang semasa penghantaran dahak untuk kajian itu tidak dapat mengikuti cadangan untuk pengumpulan bahan yang betul. Dalam kes ini, seseorang bimbang tentang semua ciri-ciri gejala penyakit tuberkulosis pulmonari.
  6. Apabila terdapat keraguan tentang hasil ujian Mantoux.
  7. Ia adalah lebih baik untuk melakukan diagnosis tuberkulosis PCR pada kanak-kanak. Prosedur ini selamat, tidak mewujudkan pendedahan radiasi tambahan, dan berkesan dalam mengesan sukar untuk mendiagnosis bentuk penyakit.

Diagnosis tuberkulosis tepat pada masanya adalah kunci kepada rawatan yang ditetapkan dengan betul dan mengurangkan penyebaran penyakit. Selalunya, kaedah pengesanan penyakit biasa tidak selalu berkesan. Oleh itu, PCR hari ini adalah salah satu cara yang paling boleh dipercayai dan selamat untuk mengesan jangkitan pada peringkat awal perkembangannya.

Terdapat kontraindikasi kepada ujian Mantoux? Analisis PCR untuk batuk kering akan dilakukan.

Tuberkulosis adalah penyakit berbahaya yang dapat dirawat dengan betul dengan diagnosis tepat pada masanya.

Salah satu kajian yang paling bermaklumat untuk mengenal pasti penyakit pada peringkat awal dipanggil kaedah tindak balas PCR (polimerase rantai).

Analisis PCR bukan sahaja merupakan yang paling bermaklumat, tetapi juga satu kajian yang paling mudah diakses yang dapat mengesan tuberkulosis dalam peringkat awal.

Apakah analisis PCR?

Semua mikroorganisma hidup, termasuk virus dan bakteria, mengandungi RNA dan molekul DNA dalam struktur mereka. Dengan menonjolkan asid ini, adalah mungkin untuk mengatakan dengan pasti kepastian agen-agen asing berada dalam darah manusia dan membuat diagnosis yang tepat.

Inti dari kaedah PCR ialah pemprosesan khas sampel cecair biologi, sebagai akibatnya adalah mungkin untuk menentukan spesies mana yang terdapat dalam mikroorganisma di dalamnya.

Analisis PCR untuk tuberkulosis: petunjuk, kebaikan dan keburukan

Teknik PCR digunakan untuk orang yang mengalami luka paru-paru yang teruk dalam kes-kes dan pernafasan pernafasan (batuk yang teruk, hemoptysis), apabila tidak mungkin untuk mendiagnosis dengan tepat mengikut gejala klinikal.

Ia disyorkan untuk menjalani kajian dan selepas hubungan langsung dengan pembawa penyakit ini. Kelebihannya termasuk:

  • Kelajuan pelaksanaan - untuk mendapatkan hasil, tidak perlu mengembangkan budaya patogen atau menjalankan prosedur kompleks yang lain;
  • sangat bermaklumat - apabila mendiagnosis tuberkulosis, ketepatan analisis mencapai 90% dan lebih tinggi;
  • kepekaan dan kekhususan yang tinggi - untuk mengenal pasti patogen dalam bahan mungkin mengandungi hanya satu sel virus;
  • universal - hampir mana-mana cecair biologi sesuai untuk analisis: dahak, darah, lavage bronkial.

Sebagai perbandingan: ketepatan mikroskopi pil perut, yang digunakan untuk mengesan tuberkulosis, hanya 40-50%, dan dengan jumlah patogen yang rendah dikurangkan kepada 10% atau kurang. Budaya sputum lebih bermaklumat, tetapi diperlukan 2 hingga 8 minggu untuk mendapatkan hasil.

Anda boleh menggunakan PCR untuk tuberkulosis dan bukannya Mantoux, jika orang itu mempunyai kontraindikasi terhadap sampel.

Kelemahan teknik ini termasuk risiko mendapatkan hasil negatif palsu. Dalam erti kata lain, ketiadaan DNA tertentu dalam dada, darah atau air kencing tidak lagi menunjukkan ketiadaan tuberkulosis dalam pesakit.

Adalah penting. Dalam diagnosis tuberkulosis pada kanak-kanak, sensitiviti analisis PCR adalah lebih rendah daripada orang dewasa, dan kira-kira 25-83%.

Foto 1. Melakukan PCR bukan Mantoux kepada kanak-kanak adalah pilihan yang baik jika dia alah atau sering sakit.

Prosedur untuk analisis PCR

Prosedur untuk analisis PCR dilakukan melalui alat khas yang disebut penguat, dan terdiri dari empat tahap. Untuk kajian ini, bahagian-bahagian DNA diperlukan di mana sintesis molekul bermula, nukleotida (pangkalan molekul DNA), serta polimerase, atau enzim yang mempercepatkan prosedur.

  1. Koleksi bahan biologi (dahak, darah, lavage bronkial).
  2. Pemanasan sampel ke suhu kira-kira 98% untuk memusnahkan struktur utama rantaian DNA.
  3. Merengsa, atau menurunkan suhu beberapa darjah untuk mengikat primer ke helai DNA.
  4. Sintesis molekul diperlukan untuk menghasilkan hasil.

Selepas menjalankan 25-30 kitaran sedemikian, sejumlah salinan DNA virus terbentuk, yang mana ia mudah menentukan agen penyebab penyakit ini.

Perhatian: analisis PCR tidak membezakan antara mikroorganisma "mati" dan "hidup", oleh itu hasilnya boleh positif untuk masa tertentu selepas rawatan.

Penyediaan untuk analisis

Sekiranya ujian darah PCR diambil untuk tuberkulosis, maka tidak perlu latihan khas, tetapi pesakit dinasihatkan untuk mematuhi peraturan umum: menahan diri daripada makan selama sekurang-kurangnya 8 jam, menghapuskan alkohol dan mengambil ubat-ubatan, jangan merokok selama satu jam sebelum mengambil bahan tersebut.

Sputum dikumpulkan pada waktu pagi selepas menyikat dan membilas mulut dengan teliti.

Jika exudate kurang diekskresikan, ekspektoran perlu diambil pada malam sebelum atau dihirup. Sputum dengan lendir, nanas, tompok putih atau kekuningan mempunyai nilai diagnostik.

Sekiranya tidak mungkin mengambil analisis dahak, bronchio swabs digunakan untuk mengenal pasti patogen. Analisis sedemikian tidak memerlukan penyediaan, dan bahan tersebut diambil seperti berikut. Dengan bantuan picagari laring, pesakit dituangkan ke dalam trakea larutan natrium klorida, yang menyebabkan batuk yang kuat - batuk cair digunakan untuk penyelidikan.

Perhatian. Hasil analisis mengganggu antibiotik, heparin dan ubat lain yang digunakan untuk rawatan tempatan, jadi kajian itu disarankan 10-14 hari selepas pentadbiran.

Kelebihan dan kekurangan PCR (a) untuk diagnosis batuk kering

Jangkitan tuberkulosis tertentu telah wujud dalam tisu manusia dan struktur selama bertahun-tahun, dan dalam keadaan tertentu ia menyebar dengan cepat ke seluruh badan dalam 2-3 bulan. Kadang-kadang sangat sukar untuk memilih kursus rawatan optimum kerana diagnosis lewat dan penyesuaian patogen kepada banyak ubat-ubatan.

Diagnosis PCR terbaru dari tuberkulosis membantu mengesan bukan sahaja penyakit maju, tetapi juga patogen itu sendiri, apabila tanda-tanda awal penyakit belum muncul.

Apakah PCR?

Diagnosis tuberkulosis oleh PCR telah muncul baru-baru ini. Pada tahun 1983, ahli mikrobiologi dari Amerika, Cary Mullis, mencipta prosedur yang mana mikroorganisma boleh dibina semula daripada bahan biologi dalam segmen pendek. Kerja ini telah menerima Hadiah Nobel.

PCR untuk tuberkulosis adalah proses rantai polimer di mana diagnosis dan pengesanan patogen virus oleh kejuruteraan genetik. Teknik ini digunakan dalam makmal imunologi, mikrobiologi, virologi dan biokimia.

Kaedah sejagat membantu doktor mendiagnosis dan mengesan proses menular walaupun selepas jam pertama jangkitan, jauh sebelum timbulnya gejala. Penyelidikan adalah mungkin walaupun dengan sedikit biomaterial.

Apa yang diperlukan untuk analisis?

  • Beberapa kepingan DNA (primer), yang mana sintesis biologi bermula;
  • Sebatian nukleotida, asas molekul DNA atau RNA;
  • Enzim polimerase yang mempercepat analisis PCR.

Apakah asas kaedah itu?

Pertama, satu segmen DNA diekstrak daripada bahan biologi daripada orang yang dijangkiti, menggunakan kaedah biosintesis gen-molekul, jenis mikroorganisma yang mana kepunyaan biofragment ditentukan selanjutnya.

Reaksi kompleks ini mengambil sedikit masa daripada beberapa biomethods. PCR menentukan patogen dalam beberapa jam, sementara tidak ada keperluan untuk mengasingkannya dari cecair biologi (sputum, serebrospinal atau media darah), tidak perlu membesarkannya dalam masa yang lama dalam medium nutrien. Adalah cukup bahawa bahan yang dikaji mengandungi sehelai DNA patogen berjangkit.

Apabila melakukan ujian darah PCR untuk tuberkulosis secara in vitro, sintesis asid ribonukleik tuberkulosis mycobacterium dicipta secara buatan.

Tahap diagnosis

Reaksi molekul oleh PCR adalah prosedur mudah yang memerlukan sedikit masa. Biomaterial yang diperlukan diambil: darah, sputum, cecair penyemburan bronkial digunakan untuk menentukan tbc.

  1. Pertama, bentuk utama DNA dimusnahkan, 2 rantai dipisahkan pada suhu tinggi (maksimum 98 ° C tidak melebihi 2 minit);
  2. Kemudian annealing dilakukan, suhu utama dikurangkan oleh beberapa bahagian, helai DNA dikaitkan dengan primer;
  3. Peringkat seterusnya dipanggil pemanjangan, dengan biosintesis struktur molekul yang diperlukan.

Untuk mendapatkan jumlah salinan DNA yang diperlukan, 25 hingga 30 kitaran mesti lulus, dan jumlah mikobakteria yang dihasilkan mudah dikenali.

Adakah perlu melakukan PCR untuk tuberkulosis?

Secara langsung kepada semua pesakit yang disyaki TVC, diagnosis rantaian tidak dilakukan, kerana prosedur memerlukan penggunaan peralatan mahal. Tidak semua institusi negeri perubatan membiarkannya dibeli, terutamanya kerana kaedah biasa mendiagnosis mycobacterium tuberculosis juga bermaklumat.

  • Berhati-hati pengambilan anamnesis, soal siasat pesakit;
  • Pemeriksaan visual;
  • Ujian tuberkulin Mantoux;
  • Pemeriksaan radiografi atau radiografi;
  • Jika perlu, diagnostik komputer;
  • Pemeriksaan mikroskopik atau bakteriologi topeng dengan sputum.

PCR untuk tuberkulosis hanya dilakukan apabila tidak mungkin untuk melakukan analisis instrumental yang lain atau dalam keadaan yang sukar didiagnosis.

Walaupun mereka telah mencipta pelbagai jenis kaedah diagnostik, bilangan pesakit dengan tuberkulosis terus berkembang. Di samping itu, insiden telah memperoleh beberapa ciri: bentuk penyakit yang teruk sering diperhatikan, bilangan kematian meningkat, patogen menjadi tahan terhadap ubat kemoterapi yang sedia ada.

Ramai orang tidak mahu menjalani pemeriksaan rutin setiap tahun, menolak vaksinasi, yang membawa kepada peningkatan kejadian. Keadaan sedemikian memerlukan kaedah penyelidikan yang berkesan dan bermaklumat yang disediakan untuk orang dewasa dan kanak-kanak yang didiagnosis dengan tbc. PCR mempunyai kelebihan berbanding kaedah diagnostik lain.

Apakah nilai kaedah?

Kajian terbaru ini telah terbukti dengan baik. Jika untuk beberapa sebab sukar untuk membuat diagnosis atau, dalam beberapa kes kontroversi, PCR mengesan bacillus tuber lebih mudah dalam bahan biologi daripada kaedah lain.

  • Kajian ringkas ini, satu segmen kecil molekul yang memungkinkan untuk membuat diagnosis yang tepat dalam masa yang singkat dalam kira-kira 5 jam, ini digunakan dalam kes-kes kecemasan, sebagai contoh, sebelum campur tangan pembedahan segera;
  • Ujian darah untuk tuberkulosis adalah mungkin apabila kaedah lain tidak tersedia atau dikontraindikasikan - kadang-kadang untuk mengesan patogen tbc, banyak Rg-shot harus diambil, dos radiasi yang terlalu besar;
  • Menggunakan tindak balas polimerase, mana-mana cecair biologi boleh diperiksa untuk kehadiran mikobakteria. Sebagai contoh, anda boleh menjalankan kajian cecair cerebrospinal dalam meningitis atau air kencing yang berbahaya dalam batuk kering urogenital;
  • Kaedah ini selamat, diagnosis tuberkulosis pada kanak-kanak yang menggunakan PCR tidak menyebabkan kesukaran;
  • Kaedah tindak balas polimer mendedahkan bacillus tubercle dalam sebarang bentuk dan peringkat penyakit;
  • Kehadiran hanya beberapa bakteria dalam biomaterial membolehkan anda melihat kehadiran mikroorganisma, kerana ini adalah tindak balas sensitif;
  • PCR dengan mudah mendiagnosis pengulangan penyakit ini.

Walaupun terdapat banyak kelebihan, semua pesakit yang disyaki belajar tbc tidak dilakukan, kerana terdapat juga kekurangan, mereka juga diambil kira.

Video

Video - diagnosis awal

Apakah kelemahannya?

Kaedah diagnosis ini agak luar biasa daripada alam, kerana ini ada sebab. Pertama sekali, kos tinggi kaedah itu diambil kira. Peralatannya mahal, klinik awam tidak mempunyai peluang untuk membeli kerana harga yang tinggi, tetapi kebanyakan makmal yang dibayar mempunyai peralatan, analisis dilakukan di dalamnya.

  • Kaedah mengesan bakteria terbunuh yang telah meninggal dunia selepas rawatan, sementara PCR menunjukkan hasil yang positif. Sejurus selepas kemoterapi, ia tidak masuk akal untuk menjalankan kajian, kerana hasilnya tidak boleh dipercayai;
  • Mutasi Mycobacterium tuberculosis adalah mudah terdedah, yang menyebabkan ketidakcekapan kaedah dan strand DNA tidak boleh disintesis secara konsisten.

Persekitaran untuk kajian itu perlu dipilih dengan teliti, darah atau air kencing hanya boleh dikumpulkan jika terdapat kecurigaan jangkitan. Pankre tidak boleh diambil untuk pemeriksaan jika tuberkulosis tulang disyaki. Dalam keadaan ini, diagnosis akan menjadi salah.

Darah dan air kencing pesakit dengan batuk yang dikaji di PCR jarang diambil, pengenalan penyakit dengan cara ini adalah dipersoalkan. Dalam biomedia, patogen ini hanya ditentukan dalam sepsis, atau dalam kes tuberkulosis yang disebarkan. Bentuk tempatan adalah yang paling biasa, dengan darah dan air kencing mereka tetap tidak berubah. Selalunya, dada diambil untuk pemeriksaan.

Siapa yang menunjukkan analisis?

Kebanyakan pesakit dihantar untuk diagnosis PCR dalam kes kontroversi dan kesukaran tuberkulosis. Bilakah profesional perubatan mengemukakan rujukan untuk penyelidikan?

  1. Sekiranya terdapat hubungan dengan seseorang yang telah dihidapi secara diagnosis dengan tuberkulosis, tetapi sukar untuk mendiagnosis menggunakan kaedah konvensional;
  2. Dalam keadaan tersebut, jika pesakit untuk menyediakan klinik adalah mustahil untuk radiografi atau kajian lain. Dalam situasi sedemikian, lebih mudah untuk memeriksa menggunakan kaedah polimer. Analisis sputum hanya dihantar ke makmal di dalam bekas khas, dan hasilnya diketahui selepas beberapa jam;
  3. Sebelum pembedahan, sangat diperlukan untuk menentukan sama ada pesakit sakit tuberkulosis, di mana PCR ditunjukkan;
  4. Oleh kerana keselamatan kaedah ini, mungkin dilakukan pemeriksaan seorang wanita hamil atau anak, tanpa membuat tambahan x-ray beban;
  5. Keputusan ujian Mantoux yang ragu-ragu.

Sesiapa yang mahu boleh diperiksa dengan bayaran jika tuberkulosis belum disahkan dengan bantuan bakteria dan fluoroskopi. Ini berlaku jika luka dalam tisu paru-paru tidak kelihatan dalam imej Rg dalam satu unjuran langsung, dan pesakit tidak dapat mengumpul sputum dengan betul, tetapi tanda-tanda tuberkulosis manusia terganggu.

Reaksi PCR moden untuk diagnosis adalah kunci kepada rawatan yang berjaya, sebagai akibatnya kelaziman penyakit berkurangan. Kaedah tradisional mengenalpasti penyakit tidak selalu menghasilkan kesan yang diingini.

Jadi analisis PCR setakat ini telah menjadi salah satu kaedah diagnostik yang boleh dipercayai dan selamat pada peringkat awal penyakit.

Analisis PCR (diagnosis) tuberkulosis

Tuberkulosis atau phthisis adalah salah satu penyakit berjangkit yang paling popular pada abad ke-21. Ejen penyebabnya adalah mikrobakteria khas - tongkat Koch.

Penyakit ini tidak hanya menyebar ke paru-paru, tetapi juga ke otak, pencernaan, sendi atau tulang belakang, sistem urogenital, dan kulit.

Menurut WHO, 10 juta orang menderita batuk kering setiap tahun, di mana 3 juta maut.

Situasi ini amat sedih di wilayah negara-negara CIS, di sini epidemik berair berlaku secara berkala. Rusia, Kazakhstan, Ukraine diketuai oleh penarafan sedih mengenai penyebaran jangkitan ini.

Infeksi mudah disebarkan melalui titisan udara atau melalui sistem pencernaan, mempengaruhi organ-organ penting, dan juga dapat dengan cepat menyesuaikan diri dengan ubat-ubatan dan kemoterapi polimer.

Salah satu faktor utama untuk rawatan tuberkulosis yang berjaya ialah pengesanan jangkitan tepat pada masanya.

Kaedah diagnostik

Kemanusiaan telah menghasilkan banyak kaedah untuk mengenali penyakit berbahaya. Diagnosis tuberkulosis dibahagikan kepada instrumental dan makmal.

Dalam kes pertama, ujian darah untuk tuberkulosis, serta sputum, air kencing.

Kumpulan kedua adalah kajian menggunakan x-ray dan endoskopi. Kaedah instrumen untuk mendiagnosis tuberkulosis, pada gilirannya, adalah radiasi dan pembedahan.

Jenis kaedah radiasi untuk mencari penyakit

  • Fluorografi adalah satu kaedah untuk mendiagnosis penyakit yang biasa kepada setiap penduduk CIS. Dengan bantuan X-ray, paru-paru dan nodus limfa hilar diperiksa.
  • X-ray dada - serupa dengan fluorografi, tetapi kaedah yang lebih baik untuk mengesan jangkitan. Gambar ini diperolehi dengan lebih terperinci dan dalam dua unjuran, tetapi prosedur ini adalah kira-kira enam kali lebih mahal. Biasanya ia digunakan selepas kecurigaan serius penyakit telah timbul.
  • Komputasi tomografi dilakukan sebagai diagnosis tambahan, juga digunakan selepas alasan yang baik untuk kehadiran jangkitan.

Kaedah diagnosis pembedahan termasuk endoskopi bronkial, serta mediastinoscopy dan thoracocoscopy.

Kaedah pertama ialah mengkaji pokok bronkus paru-paru dengan bantuan "menguji" organ ini. Dua cara yang selebihnya memungkinkan untuk mengkaji bahagian pleura dari paru-paru dengan menusuk dada.

Ketiga kaedah ini adalah campur tangan pembedahan yang serius dan paling sering digunakan dalam proses perkembangan penyakit.

Ujian makmal termasuk:

  • Analisis sputum untuk bacillus tubercle.
  • Pemeriksaan mikroskopik.
  • Diagnosis tuberkulosis PCR

Apakah diagnosis PCR?

Salah satu kaedah diagnosis makmal yang paling maju pakar-pakar jangkitan memanggil tindak balas rantai polimerase.

Kaedah ini dibangunkan oleh saintis AS yang terkenal Carrie Mullis pada tahun 1983, yang mana beliau memenangi Hadiah Nobel.

Analisis PCR adalah pengasingan zarah-zarah DNA dari sputum, darah, cecair serebrospinal, najis, dsb. untuk biosintesis seterusnya.

Dengan bantuan kajian genetik molekul kompleks, sifat mikrob di dalam tubuh pesakit ditentukan.

Analisis jenis tuberkulosis ini dilakukan dalam beberapa peringkat:

  • Pertama, sampel biologi diambil. Bahan diletakkan di dalam bekas khas dan dihantar ke makmal.
  • Di pusat penyelidikan, analisis dipanaskan hingga 97 derajat. Ini memungkinkan untuk memusnahkan struktur genom DNA mikroorganisma, yang terdiri daripada beberapa rantai.
  • Suhu itu diturunkan secara khusus supaya primer (peserta DNA yang mula proses biosintesis bermula) boleh menyambung ke mana-mana rantai asid deoksiribonukleik.
  • Selepas itu, biosintesis molekul yang diperlukan untuk pengesanan dilakukan.

Selepas 25-30 kitaran berulang dalam proses penyelidikan makmal, doktor mempunyai peluang untuk mengenali sama ada mikroorganisme berjangkit hadir di dalam tubuh pesakit atau tidak.

Kelebihan dan kekurangan

PCR untuk tuberkulosis adalah teknik diagnostik yang paling moden. Kaedah ini memungkinkan untuk mengesan jangkitan di mana-mana peringkat dengan kebolehpercayaan yang tinggi. Faedah:

  • Kelajuan - kajian mengambil masa tidak lebih daripada lima jam. Keputusan ujian untuk bakteria mikro boleh dijumpai dalam masa 24 jam.
  • Keselamatan - Kaedah PCR tidak mempunyai kontraindikasi umur.
  • Ketepatan masa - teknik ini dapat mengesan tuberkulosis dalam peringkat tersebut apabila penyakit ini tidak mempunyai gejala.
  • Takat ketepatan yang tinggi - jika terdapat hanya beberapa mikroorganisma dalam analisis, mereka akan dijumpai menggunakan tindak balas rantai polimerase. Juga, teknik ini memungkinkan untuk mengenal pasti agen penyebab tuberkulosis dengan mudah.
  • Universalality - diagnostik digunakan bukan sahaja untuk pengesanan penggunaan, tetapi juga untuk penyakit lain seperti klamidia, gonorrhea, dll.

Walaupun banyak kelebihan, penggunaan teknik ini dalam amalan perubatan domestik adalah pengecualian dan bukannya peraturan. Terdapat beberapa sebab untuk ini.

Kelemahan kaedah ini ialah:

  • Kos kajian yang tinggi.
  • Kaedah ini tidak sesuai untuk mereka yang menjalani terapi, kerana kehadiran bakteria Koch yang mati boleh mengakibatkan hasil positif palsu.
  • Dalam kes mutasi mikroorganisma berjangkit, genom mereka tidak boleh diiktiraf dengan membuat kesimpulan palsu.
  • Adalah penting untuk memilih persekitaran pengesanan yang tepat. Sebagai contoh, keputusan ujian darah untuk PCR untuk tuberkulosis (kemasukan pencairan) akan menjadi negatif sekiranya sistem saraf dijangkiti.
  • Ia tidak selalu mungkin untuk menggunakan kaedah ini untuk pesakit yang didiagnosis dengan lesi paru-paru.

Di samping itu, analisis seperti itu untuk batuk kering memerlukan peralatan moden yang 90 peratus tidak mempunyai hospital. Dalam CIS, analisis sedemikian boleh dilakukan oleh rangkaian klinik Invitro.

Syarat analisis

Cadangan untuk pesakit yang menjalani ujian sedemikian untuk batuk kering bergantung kepada jenis analisis yang mereka lalui.

Apabila mengambil darah untuk PCR, adalah perlu untuk menahan merokok sejam sebelum prosedur, bagi dua untuk berhenti mengambil minuman beralkohol dan makanan berlemak.

Ia juga disyorkan untuk menahan diri daripada melakukan senaman fizikal, tetapi juga mustahil untuk mengambil darah untuk tuberkulosis pada perut kosong.

Apabila mengambil sapu dari mulut dan rongga hidung, anda tidak boleh makan 2-4 jam sebelum prosedur, jika tidak, ia tidak akan memberi maklumat. Juga, jangan minum alkohol.

Untuk bacaan tepat analisis, dilarang untuk merokok lebih awal daripada sejam sebelum prosedur. Pada malam itu, jangan sembuh dari gigi anda dan gunakan semburan semburan dan mulut.

Jika anda mengesyaki tuberkulosis sistem urogenital, pesakit selama 2-3 hari sebelum penghantaran harus mengecualikan seks, selama 2-3 jam sebelum prosedur, jangan pergi ke tandas "dengan cara yang kecil". Organ-organ kemaluan hendaklah dibasuh dengan air kosong tanpa cara istimewa.

Wanita dinasihatkan untuk tidak menggunakan tablet faraj, suppositori, bola, dan juga untuk mengelakkan ujian pada hari kritikal.

5 hari sebelum penghantaran, hasilnya perlu untuk meninggalkan prosedur kolposkopi, dan juga ultrasound transvaginal,

Kapan diagnostik PCR digunakan?

Tidak semua klinik mempunyai diagnosis yang kompleks, tetapi doktor semakin menggunakan kaedah penyelidikan sedemikian. Biasanya analisis seperti ini dijalankan dalam keadaan khas.

  • Sekiranya keputusan ragu manta, ujian darah untuk tuberkulosis boleh digunakan.
  • Dalam kes di mana pesakit telah bersentuhan dengan orang yang dijangkiti, tetapi doktor yang menghadiri tidak boleh menentukan diagnosis dengan tepat.
  • Sekiranya pembedahan kecemasan, apabila perlu untuk mengetahui dalam masa yang singkat sama ada pesakit mempunyai jangkitan ini.
  • Apabila pesakit hamil, apabila kaedah penyelidikan lain tidak cukup selamat untuk bayi yang baru dilahirkan.

Perlu diingat bahawa diagnosis ini disyorkan untuk kanak-kanak kerana keselamatannya.

Sekiranya pelajar mempunyai kontraindikasi terhadap ujian tuberculin, dia boleh mengambil ujian darah untuk tuberkulosis dan bukannya mantel oleh PCR.

Analisis PCR untuk batuk kering

Analisis PCR untuk tuberkulosis adalah yang paling popular di kalangan penyelidikan perubatan dalam bidang penyakit ini.

Tetapi bagaimana untuk memberi amaran kepada diri sendiri dan orang tersayang daripada penyakit yang dahsyat ini? Bagaimana untuk lulus ujian yang diperlukan untuk PCR?

Gejala batuk kering dan pencegahannya

Pakar mengatakan bahawa kira-kira 30% daripada jumlah penduduk menderita batuk kering.

Peratusan tertinggi penyakit ini dikembangkan di negara-negara yang belum berkembang. Ini yang paling kerap berlaku akibat imuniti dikurangkan pada manusia.

Penyakit ini adalah salah satu yang tertua. Penyakit ini boleh didapati di lapisan otak, dalam saluran pencernaan, pada sendi dan tulang belakang, dalam sistem kencing dan dalam patch kecil pada kulit manusia.

Pakar adalah yang paling mudah untuk menentukan kulit yang terjejas. Di tapak terdapat segel kecil, yang meningkat dari masa ke masa, pecah dengan cecair putih.

Ejen penyebab tuberkulosis paling kerap dijangkiti apabila bercakap dengan orang yang sakit, apabila dia batuk atau bersin. Biasanya, penyakit itu terus tanpa gejala atau mempunyai bentuk terbuka, tetapi diagnosis tuberkulosis PCR memungkinkan untuk mengesannya pada peringkat awal dan dalam keadaan kecemasan.

Gejala penyakit: batuk basah yang berpanjangan, demam, menggigil, berpeluh berlebihan pada waktu malam, kehilangan berat badan yang tajam, rasa keletihan dan kelemahan.

Bentuk terbuka penyakit adalah yang paling berbahaya. Seseorang yang menderita batuk kering dapat menjangkiti orang yang sihat.

Gejala yang paling penting dalam penyakit paru ialah hemoptysis. Ia berlaku dalam sebarang bentuk penyakit.

Dalam sesetengah keadaan, ini boleh mengakibatkan pendarahan dari paru-paru seseorang. Ia amat berbahaya dan memerlukan campur tangan perubatan segera.

Untuk pencegahan dan pengiktirafan terhadap batuk kering, pakar menetapkan: sampel - ujian tuberculin, pemeriksaan bahan biologi, fluorografi, sinar-X dan ujian darah, sputum atau air liur.

Diagnosis penyakit ini

Diagnosis yang lebih baik daripada penyakit - ia betul dan semasa rawatan bermula. Dalam kebanyakan kes, kaedah biasa mengesan patogen tidak selalu mempunyai kesan dan sudah lapuk.

Cara yang paling penting untuk mengenal pasti dan mendiagnosis penyakit paru adalah ujian peperiksaan perubatan. Biasanya menggunakan diagnostik PCR. Tinjauan ini ditemui agak baru-baru ini, pada tahun 1983, oleh biokimia Amerika Mullis.

Ujian dalam pesakit dengan tuberkulosis pulmonari dilakukan secara eksklusif dalam kes-kes khas apabila sukar untuk mendirikan diagnosis atau tidak mungkin untuk mengesan penyakit dengan cara instrumental.

Tindak balas rantai polimerase adalah kaedah PCR yang boleh dipercayai. Analisis ini memungkinkan untuk menentukan agen penyebab, berapa lama dalam darah, air kencing dan cairan tulang belakang. Pemeriksaan perubatan sedemikian adalah yang paling selamat.

Analisis PCR memberikan 100% hasil.

Ia mempunyai sensitiviti yang tinggi, yang membantu mengenali penyakit untuk jam pertama kali selepas jangkitan, sebelum gejala penyakit muncul. Kaedah analisis ini memberikan keputusan dalam masa beberapa jam selepas penghantaran bahan biologi. Penyebaran analisis ini dilakukan tiga kali, tetapi aspirasi perut berpenyakit hanya dijalankan di hospital.

Tiga kriteria telah dibangunkan untuk menentukan keputusan: ketepatan yang tinggi, kepekaan sehingga 90%, kekhususan.

Ujian untuk PCR digunakan dalam beberapa kes:

  1. untuk mendiagnosis tuberkulosis pulmonari;
  2. tentukan sumber penyakit itu;
  3. definisi penerokaan extrapulmonary;
  4. diagnosis berulang.

Menilai hasilnya, dan menetapkan rawatan perubatan yang betul, hanya boleh pakar. Adalah sangat penting untuk menetapkan skim rawatan perubatan yang betul untuk pengesanan tuberkulosis, adalah perlu untuk melakukan ujian untuk kerentanan patogen kepada alat anti-tuberkulosis.

Pelbagai ujian perubatan tuberkulosis

Anda boleh mengambil analisis yang diperlukan dalam dua cara: mengambil darah atau air liur dari seseorang atau mengambil ubat.

Ujian darah oleh PCR boleh terdiri daripada dua jenis: ELISA dan PCR. Kajian sebegini membantu memantau keberkesanan rawatan perubatan.

ELISA membantu mencari antibodi dalam tubuh manusia yang menentang mikrob tuberculosis. Kajian ini dilakukan sekali sehari. Kekurangan utama adalah kepekaan yang rendah, yang membolehkan hanya menentukan satu penyakit dengan tahap jangkitan yang rendah.

Penyelidikan yang paling popular dan berkesan adalah analisis terhadap mycobacterium tuberculosis. Dengannya, para doktor dapat dengan mudah mencari DNA bakteria dalam darah manusia. Kaedah ini juga digunakan untuk menentukan bilangan bakteria, untuk mengawal rawatan pesakit, untuk mengesan pengulangan awal.

Air liur PCR adalah salah satu kaedah penyelidikan yang paling moden. Analisis sedemikian akan membantu mengenal pasti bakteria berjangkit dalam air liur. Menggunakan PCR meningkatkan bilangan serpihan DNA mikrob berbahaya.

Kaedah budaya ini bertujuan untuk pemeriksaan sputum manusia, untuk pengesanan mikrobakteria.

Bersedia untuk ujian PCR

Perhatian, anda memerlukan penyediaan air liur yang tepat untuk PCR. Sekiranya semua preskripsi tidak diikuti, analisis mungkin positif palsu.

Sebelum mengambil ujian, dilarang merokok, mengambil makanan dan ubat-ubatan, serta mengambil alkohol selama 12 jam. Ia dilarang untuk menyikat gigi anda, anda tidak boleh menggunakan bilas, penyegar untuk mulut dan gigi.

Dilarang menggunakan gincu dan masuk ke dalam hubungan intim. Dibenarkan untuk membilas mulut anda dengan air rebus yang biasa;

Pemeriksaan ini akan membantu mengenal pasti: herpes, chlamydia, tuberculosis, patogen pneumonia, onkovirus, barolleosis, mononucleosis, HIV, hepatitis dari semua jenis, rubella.

Analisis untuk mikobakteria terutamanya dijalankan dalam kes kontroversi, iaitu jika sukar untuk membuat diagnosis atau ada hubungan dengan pesakit dengan tuberkulosis, sebelum memulakan operasi, untuk mengesan penyakit ini. Digunakan untuk pemeriksaan seorang wanita hamil, kerana kaedah ini adalah yang paling selamat untuk ibu dan janin.

Kadang-kadang analisis dilakukan di klinik swasta, kerana pesakit tidak mematuhi peraturan untuk ujian, tetapi pada masa yang sama ia bimbang tentang semua gejala. Analisis boleh dilakukan apabila pakar tidak pasti selepas menjalankan ujian Mantoux atau pesakit adalah kanak-kanak.

Kelebihan dan kelemahan ujian perubatan untuk menentukan batuk kering

PCR adalah cara yang paling popular dan berkesan untuk menentukan penyakit ini.

Perbezaan terbesar dari kajian lain adalah hasil yang cepat dan tepat.

Kelebihan pemeriksaan perubatan ini boleh dilakukan untuk kajian urologi, ginekologi, onkologi, infeksi, hematologi, paru-paru, gastroenterologi dan lain-lain.

Kelebihan utama kajian perubatan semacam itu ialah ujian darah, dada dan air liur siap dalam waktu yang singkat (ia akan mengambil masa 5 jam untuk mengesan penyakit ini). Pemeriksaan perubatan sedemikian membolehkan ujian dijalankan apabila kaedah tertentu untuk mengkaji sesuatu penyakit adalah dilarang atau tidak boleh diakses. Hebat untuk mengesan kambuh pada manusia.

Terima kasih kepada analisis ini, menjadi mungkin untuk menjalankan penyelidikan untuk sebarang persekitaran biologi. Ia dibenarkan mengambil bahan dari kanak-kanak. PCR memungkinkan untuk mengenal pasti agen penyebab di mana-mana peringkat penyakit ini. Oleh kerana kepekaannya yang tinggi, mungkin terdapat mikrob walaupun hanya beberapa bakteria yang ada.

Kaedah PCR memperluaskan keupayaannya. Ia juga digunakan untuk menentukan paterniti, untuk pembuatan gen baru, mutasi, untuk melintasi elemen DNA, dan sebagainya.

Kelemahan kajian ini adalah kaedah tinjauan yang mahal.

Selepas rawatan perubatan, ujian darah boleh menunjukkan kehadiran patogen yang hidup atau mati dalam kuantiti yang kecil, selepas pemeriksaan perubatan, ia akan memberikan hasil yang positif.

Bakteria dan mikrob boleh menjalani mutasi, dan selepas itu PCR tidak akan dapat mengenal pasti dan mengenal pasti mereka, jadi hanya pakar yang boleh menetapkan kajian persekitaran yang diperlukan, jika tidak, pemeriksaan perubatan akan tidak berkesan.

Selepas ujian, terdapat hasil negatif, tetapi ini tidak mengecualikan kemungkinan seseorang dijangkiti tuberkulosis. Pemeriksaan perubatan seperti itu dijalankan untuk pesakit yang mengalami penyakit paru-paru yang teruk, apabila mana-mana kajian lain tidak memberikan hasil yang tepat. PCR akan berguna untuk orang yang mempunyai batuk kering paru-paru dan extrapulmonary.

Malangnya, peralatan perubatan untuk mengesan patogen tuberkulosis sangat mahal.

Hospital awam dan klinik tidak mampu, tetapi klinik berbayar mengambil ujian pesakit dan menyediakan hasil yang siap dalam masa yang singkat.

PCR untuk batuk kering

Diagnosis tuberkulosis PCR

Tuberkulosis adalah jangkitan tertentu, tumpuannya mungkin dalam tisu manusia selama bertahun-tahun, dan kemudian menyebar selama beberapa bulan. Ini adalah penyakit kronik yang rejimen rawatan yang optimum sukar diperoleh. Salah satu sebab untuk ini ialah diagnosis lewat, apabila mycobacteria, sementara di tubuh manusia, telah disesuaikan dengan banyak ubat.

Apakah diagnosis kaedah moden apa? Diagnostik PCR - apa itu? Bagaimana kajian ini dilakukan? Dalam kes yang mana tuberkulosis didiagnosis dengan kaedah ini dan apakah intipatinya?

Apakah diagnosis PCR?

Ini adalah salah satu kaedah yang paling moden untuk mendiagnosis bukan sahaja penyakit, tetapi juga pengesanan bahan biologi. Diagnosis PCR dicipta baru-baru ini.

Sekitar 30 tahun yang lalu pada tahun 1983, seorang biokimia Amerika, Carey Banks Mullis, mencadangkan skim pemulihan kompleks untuk bahan biologi mikroorganisma dalam satu segmen pendek.

Terima kasih kepada penemuannya, saintis itu dianugerahkan anugerah tertinggi - Hadiah Nobel.

Apakah itu - diagnosis PCR jangkitan? Reaksi rantai polimerase (PCR) adalah diagnosis pengesanan penyakit virus, berdasarkan kaedah kejuruteraan genetik.

Ia digunakan secara meluas dalam mikrobiologi perubatan, imunologi dan virologi. Kaedah ini universal dan membantu membuat diagnosis dengan sedikit bahan.

Kenal pasti jangkitan boleh secara harfiah dalam jangkamasa pertama jangkitan dengannya, jauh sebelum gejala pertama penyakit muncul.

Kaedah ini terdiri daripada mendapatkan dari bahan dari orang yang sakit bukan patogen itu sendiri, tetapi serpihan genom (zarah DNA), biosintesisnya dengan penentuan berikutnya yang mana kelas mikroorganisma bahan genetik yang diperoleh tergolong melalui kaedah genetik molekul.

Walaupun ia adalah proses yang kompleks, ia mengambil masa yang lebih sedikit daripada banyak kaedah biologi mengesan agen berjangkit. Dalam masa beberapa jam, mikroorganisma boleh dikesan oleh PCR.

Untuk melakukan ini, tidak perlu mengasingkannya dari persekitaran (darah, cecair cerebrospinal, dahak) dan membesar untuk masa yang lama pada media nutrien tiruan.

Adalah cukup bahawa serpihan kecil sehelai DNA agen berjangkit hadir dalam bahan yang sedang dipelajari.

Asas tindak balas adalah kemungkinan di bawah keadaan buatan (in vitro) untuk menghasilkan sintesis molekul asid nukleus ejen berjangkit.

Apa yang diperlukan untuk PCR?

  1. Primer adalah segmen DNA yang mana biosintesis atau penciptaan bermula.
  2. Nukleotida atau sebatian kompleks yang menjadi asas kepada molekul DNA atau RNA.
  3. Reaksi rantai polimerase tidak mungkin tanpa adanya polimerase, yang merupakan enzim yang mempercepat PCR.

Tahap diagnostik PCR

Bagaimana diagnosis molekul dilakukan oleh PCR? Prosedur ini mudah dan mengambil masa yang singkat, dengan mengambil kira pengumpulan bahan.

  1. Sebelum memulakan kajian, ambil bahan biologi yang diperlukan - ini adalah air basuh bronkial, darah, kandungan lambung, dan dahak. Jenis bahan biologi bergantung kepada patogen yang disyaki.
  2. Denaturasi atau pemusnahan struktur utama DNA, yang terdiri daripada dua rantai. Intipati tahap ini adalah untuk memisahkan kedua-dua litar di bawah pengaruh suhu tinggi (maksimum adalah 98 ºC, yang tidak berlangsung lebih dari dua minit).
  3. Di peringkat seterusnya PCR, dipanggil penyepuhlindapan, suhu dikurangkan dengan beberapa darjah sehingga primer akan terikat pada helai DNA.
  4. Pemanjangan, di mana sintesis molekul yang dikehendaki berlaku secara langsung.

Akibatnya, hanya 25-30 kitaran sedemikian menerima bilangan salinan DNA mikroorganisma yang diperlukan, yang mudah dikenali.

Tidak mungkin benar-benar semua orang yang disyaki menggunakan tuberkulosis untuk melakukan PCR, kerana kaedahnya memerlukan peralatan mahal. Tidak semua klinik awam mampu membelinya. Di samping itu, ia berlaku bahawa kaedah biasa mendiagnosis jangkitan dalam kebanyakan kes juga membenarkan diri mereka sendiri.

Ini termasuk:

  • tinjauan pesakit, pengambilan sejarah;
  • pemeriksaan penuh orang itu;
  • penyelidikan menggunakan ujian tuberculin Mantoux;
  • X-ray atau fluorografi
  • diagnostik komputer jika perlu;
  • Kaedah penyelidikan mikrobiologi: mikroskopi smear dan pemeriksaan bacteriological dahak.

PCR untuk tuberkulosis dilakukan dalam kes-kes khas apabila sukar untuk membuat diagnosis atau tidak mungkin untuk menjalankan kaedah instrumental lain.

Walaupun terdapat banyak kaedah diagnostik, kejadian tuberkulosis terus berkembang. Pada masa ini, tidak hanya pertumbuhannya, tetapi juga ciri-ciri lain:

  • penyakit ini sering berlaku dalam bentuk yang teruk;
  • bilangan kes maut meningkat;
  • semakin tahan terhadap ubat kemoterapi moden yang didiagnosis.

Kehadiran rakyat sendiri menjalani pemeriksaan kesihatan rutin setiap tahun, penolakan vaksinasi menyebabkan penyebaran tuberkulosis. Dalam keadaan sedemikian, kaedah penyelidikan cepat, bermaklumat dan berkesan diperlukan, yang harus diakses oleh kanak-kanak dan orang dewasa. Semua kaedah diagnostik di atas adalah lebih rendah daripada PCR.

Faedah mendiagnosis batuk kering dengan PCR

Penyelidikan ini, walaupun baru, telah terbukti dengan baik, terutamanya dalam kes-kes kontroversi di mana ia tidak mungkin membuat diagnosis untuk beberapa sebab.

Terima kasih kepada PCR, lebih mudah untuk mengesan agen penyebab tuberkulosis dalam bahan ujian.

Kelebihan diagnostik PCR adalah seperti berikut.

  1. Ini adalah analisis cepat. Serpihan kecil molekul DNA dapat digunakan untuk mendiagnosis hanya dalam beberapa jam (sekitar lima), yang berhasil digunakan dalam situasi kecemasan ketika, misalnya, sebelum operasi diperlukan untuk menentukan apakah seseorang sakit tuberkulosis.
  2. Analisis PCR dibenarkan dalam kes apabila kaedah lain tidak tersedia atau dilarang (untuk mengesan tuberkulosis pulmonari, kadang-kadang perlu mengambil beberapa gambar radiografi, yang akan membuat dos radiasi yang besar).
  3. Dengan bantuan PCR, sebarang persekitaran biologi diperiksa untuk kehadiran patogen di dalamnya. Sebagai contoh, anda boleh menjalankan kajian cecair serebrospinal, jika ada suspek meningitis tuberkulosis.
  4. Mengizinkan diagnosis PCR penyakit berjangkit pada kanak-kanak, kerana kaedahnya selamat.
  5. Membolehkan anda mengenal pasti patogen di mana-mana peringkat penyakit ini.
  6. Kepekaan tinggi PCR memungkinkan untuk mengesan Mycobacterium tuberculosis, walaupun terdapat hanya beberapa mikroorganisma dalam bahan biologi.
  7. Adalah baik untuk menjalankan diagnosis penyakit berulang.

Selepas semua PCR yang dibaca seolah-olah kaedah diagnostik yang hampir sempurna, yang harus dilakukan kepada semua orang dengan kecurigaan tuberkulosis. Tetapi ada juga kekurangan di sini, mereka mesti dipertimbangkan.

Kelemahan PCR dalam diagnosis tuberkulosis

Di zaman kita, diagnostik sedemikian lebih jarang daripada keteraturan. Dan untuk ini ada alasan.

  1. Ini adalah kaedah penyelidikan yang mahal. Di banyak klinik, peralatan untuk PCR tidak hadir kerana kos yang tinggi, tetapi analisis masih boleh dilakukan di makmal berbayar.
  2. Sejurus selepas rawatan, mycobacteria mati atau hidup dalam kuantiti yang kecil mungkin masih terdapat di dalam tubuh manusia (hasilnya akan positif semasa diagnosis PCR), jadi kaedah ini tidak tepat pada masa ini, tidak masuk akal untuk melaksanakannya.
  3. Mutasi mikobakteria mengakibatkan PCR tidak berkesan - urutan serai DNA biasa tidak dapat disintesis.
  4. Ia adalah perlu untuk memilih persekitaran yang sesuai untuk kajian ini, darah diambil hanya jika ia disyaki dijangkiti (sepsis), tidak ada keperluan untuk mengambil ubat jika ada masalah tuberkulosis organ-organ sistem saraf. Dalam kes ini, PCR tidak dapat mengesan patogen dan diagnosis akan menjadi tidak diketahui.

Petunjuk untuk pengesanan tuberkulosis menggunakan analisis PCR

Diagnosis tuberkulosis PCR paling kerap dilakukan dalam kes kontroversi. Bilakah doktor merujuk kajian ini?

  1. Sekiranya sukar untuk membuat diagnosis menggunakan kaedah yang sedia ada, tetapi ada hubungan dengan tuberkulosis yang sakit.
  2. Sekiranya tidak mustahil untuk menghantar orang ke poliklinik untuk peperiksaan rutin rutin untuk tuberkulosis, lebih mudah untuk memeriksa dia menggunakan PCR, kerana pemeriksaan dahaga boleh dihantar ke dalam balang dan diagnosis disahkan dalam beberapa jam.
  3. Jika seseorang akan menjalani operasi kecemasan dan anda perlu segera mengetahui sama ada dia mempunyai tuberkulosis.
  4. Sekiranya perlu, wanita hamil juga lebih baik untuk menyaring tuberkulosis menggunakan PCR, kerana kaedahnya selamat.
  5. Secara berbayar, sesiapa yang tidak mengesahkan tuberkulosis dengan kaedah bacteriological dan fluoroscopy boleh menjalani diagnosis. Ini berlaku apabila luka di paru-paru tidak dapat dilihat dalam imej langsung, dan orang semasa penghantaran dahak untuk kajian itu tidak dapat mengikuti cadangan untuk pengumpulan bahan yang betul. Dalam kes ini, seseorang bimbang tentang semua ciri-ciri gejala penyakit tuberkulosis pulmonari.
  6. Apabila terdapat keraguan tentang hasil ujian Mantoux.
  7. Ia adalah lebih baik untuk melakukan diagnosis tuberkulosis PCR pada kanak-kanak. Prosedur ini selamat, tidak mewujudkan pendedahan radiasi tambahan, dan berkesan dalam mengesan sukar untuk mendiagnosis bentuk penyakit.

Diagnosis tuberkulosis tepat pada masanya adalah kunci kepada rawatan yang ditetapkan dengan betul dan mengurangkan penyebaran penyakit. Selalunya, kaedah pengesanan penyakit biasa tidak selalu berkesan. Oleh itu, PCR hari ini adalah salah satu cara yang paling boleh dipercayai dan selamat untuk mengesan jangkitan pada peringkat awal perkembangannya.

Ujian darah untuk tuberkulosis oleh PCR

PCR untuk tuberkulosis adalah perlu untuk diserahkan kepada sesiapa yang ingin tahu nuansa keadaan mereka untuk penyakit ini.

Untuk penyingkiran pembenihan dalam kes-kes yang disyaki oleh tuberkulosis lesi paru-paru, pilihan terbaik adalah menggunakan kandungan perut (ini menentukan penunjuk seperti immunoglobulin, ESR, mycobacteria dan leukocytes).

Di samping itu, tomografi, ujian Mantoux, ELISA boleh digunakan untuk mengesahkan diagnosis atau jika tuberkulosis disyaki.

Maklumat am

PCR disyorkan pada waktu pagi.

Ia sangat disyorkan untuk menjalankan sebelum kandungan perut dikosongkan oleh keseluruhan jisim lebam yang ditelan pada waktu malam (hari tuberculosis yang terakhir dibelanjakan mengawal ini).

Dalam hal ini, PCR untuk kehadiran tuberkulosis adalah perlu, seperti tomografi, ELISA dan Mantoux. Mereka membenarkan anda mengenal pasti status mikobakteria dan air kencing, ESR, jumlah imunoglobulin dan menentukan keadaan semasa paru-paru.

Harus diingat bahawa analisis batuk kering perlu dilakukan dengan mematuhi piawaian tambahan dan mengambil kira beberapa nuansa:

  • Penanaman dilakukan selama tiga kali, bagaimanapun, aspirasi segala sesuatu yang ada di perut, perlu dilakukan di rumah sakit;
  • pembiakan kehadiran orang ramai di perut mendedahkan mycobacteria dalam kurang daripada 50% diagnosis, walaupun di bawah keadaan yang paling optimum - ultrasound disyorkan bukannya;
  • Hasil negatif tidak dapat mengecualikan kemungkinan membangunkan tuberkulosis, di mana ESR, immunoglobulin dan petunjuk lain berubah;
  • bahkan kurang terdedah kepada penyebaran bahan PCR untuk keadaan patologi yang diperolehi dalam rangka pemeriksaan bronkoskopik, tidak termasuk kecurigaan tuberkulosis pulmonari pada anak-anak.

Lebih banyak mengenai PCR

Jika ujian darah untuk tuberkulosis dan sampel yang sama adalah positif (ini mengesahkan Mantoux, tomografi, ELISA dan diagnostik tambahan), perlantikan terapi anti-tuberkulosis diperlukan. Ini juga perlu dalam kes-kes lain, iaitu ketika menghubungi seseorang dengan virus tuberkulosis, yang mengesahkan x-ray paru-paru dan gejala umum.

Untuk mengenal pasti algoritma rawatan, apabila mengenal pasti darah untuk tuberkulosis, keputusan pengenalpastian kerentanan terhadap agen-agen patogen tertentu digunakan.

Ia mesti diperolehi sebagai sebahagian daripada pemeriksaan pesakit yang telah bersentuhan dengan pesakit. Dalam kes ini, diagnosis juga perlu termasuk langkah-langkah seperti Mantoux, tomografi, urinalisis, dan berkaitan dengan mikobakteria.

Kriteria tidak kurang penting ialah antibodi kepada tuberkulosis pada kanak-kanak dan orang tua.

Jika pesakit dan punca jangkitannya tidak diketahui, dan juga jika dia telah mengenal pasti kehadiran ketegangan tuberkulosis yang tahan, bahan (air kencing, dahak) yang diperoleh dari seseorang disemai. Hasilnya dari segi keadaan paru-paru di mana diagnosis itu didasarkan adalah penting untuk orang dewasa dan ketika menetapkan perawatan kepada seorang anak.

Kelebihan kaedah

Ujian darah untuk tuberkulosis, seperti PCR, mempunyai kelebihannya.

Terakhir kaedah yang dibentangkan adalah kaedah utama, berdasarkan pengenalan nisbah asid nukleik berkaitan dengan mikobakteria, yang digunakan pada pesakit dengan batuk kering.

Sebagai pengenalpastian komponen tuberkulosis, urutan DNA jenis nukleotida khusus digunakan, yang perlu diluluskan dan analisis umum kanak-kanak perlu dilakukan.

Perlu diperhatikan bahawa diagnosis tuberkulosis pulmonari pada orang dewasa dan dalam pelaksanaan anak itu, mendedahkan kekhususan dan kerentanan pelbagai pilihan. Pada masa yang sama, ketepatan PCR lebih daripada 90% (untuk kuman dan budaya air kencing, keputusan yang dilaporkan harus diambil sebagai 100% berkenaan dengan mikobakteria).

Teknik instrumen disyorkan sebaliknya.

Berbanding dengan diagnosis klinik tuberkulosis pulmonari pada kanak-kanak, perlu diperhatikan bahawa kekhususan PCR boleh berubah dari 80 hingga 100%. Kerentanan adalah dari 25 hingga 83% pada kanak-kanak dan orang tua.

Ujian Mantoux (yang dikenali sebagai diagnosis tuberculin), serta tomografi dan koleksi keseluruhan, dapat menunjukkan hasil akhir yang lebih tepat. Dalam hal ini, disyorkan diagnostik tambahan dengan bantuan mereka.

Ini amat diperlukan untuk mengenal pasti nisbah urin dan imunoglobulin berhubung dengan kanak-kanak dan orang lain yang memerlukan diagnosis yang paling menyeluruh.

Kelemahan PCR

Bercakap mengenai kelebihan PCR dalam mengenal pasti lesi sistem paru-paru, tidak boleh tetapi perhatikan kelemahan teknik yang dibentangkan, khususnya, bahawa:

  • Keputusan negatif PCR tidak boleh 100% faktor yang menunjukkan ketiadaan penyakit dan patologi bukan jenis lain;
  • PCR tidak boleh selalu digunakan pada orang yang mengalami luka yang teruk dalam sistem paru-paru dan dalam keadaan di mana tidak mustahil untuk menentukan diagnosis mengikut data tertentu;
  • PCR kurang bermanfaat dalam mengenal pasti tuberkulosis pada orang yang mempunyai imunodefisiensi, serta dalam mendiagnosis penyakit jenis ekstrapulmonary.

Kaedah diagnostik lain dan Hari Tuberkulosis Sedunia menunjukkan bahawa mikobakteria paling dikenal pasti apabila tomografi, ujian Mantoux dan aktiviti lain dilakukan pada kanak-kanak dan orang tua.

Teknik diagnostik lain

Banyak garis panduan, seperti Hari Tuberkulosis Sedunia, menunjukkan bahawa diagnostik akan menjadi petunjuk utama menggunakan pelbagai teknik: tomografi, ujian Mantoux, urinalisis, dan kaedah tambahan untuk mengenal pasti mycobacterium. Kriteria penting dalam pelaksanaan diagnosis adalah urutan dan kekerapannya.

Ahli pulmonologi mencadangkan analisa holistik dan Mantoux untuk disyaki penyakit, sebelum memulakan rawatan, 2-3 kali semasa kitaran pemulihan dan satu bulan selepas itu.

Di samping itu, kaedah tambahan ditunjukkan untuk menjawab soalan bagaimana untuk diuji untuk batuk kering.

Kita bercakap mengenai fluorografi, tusuk, bronkoskopi dan juga ultrasound (tidak secara mendalam dalam semua keadaan yang melibatkan batuk kering, oleh itu, ujian darah tambahan dan sputum perlu dilakukan, Mantoux).

Sebaliknya, tidak boleh diterima untuk menjalankan ujian lain, kerana mereka tidak akan 100% berkesan.

Maklumat tambahan

Untuk menjadikan Hari Tuberkulosis Sedunia hari yang kurang popular, ciri-ciri tambahan perlu diambil kira apabila mendiagnosis mikobakteria. Salah satu tujuan PCR adalah untuk menghapuskan pembentukan komplikasi dan kemungkinan tidak termasuk keradangan.

Dalam hal ini, perhatian harus dibayar kepada tusuk, sebagai kaedah untuk menghapus nisbah bakar berlebihan. Kaedah ini tidak boleh digunakan dalam semua situasi, tetapi ia dirasakan oleh banyak ahli pulmonologi bukan sahaja sebagai ukuran diagnostik, tetapi juga sebagai terapeutik. Oleh itu, sebelum memohon, anda perlu berunding dengan pakar dan lakukannya di setiap peringkat perkembangan penyakit ini.

Memandangkan kelebihan dan kekurangan PCR, boleh dikatakan bahawa untuk diagnosis yang paling tepat adalah betul untuk menggunakan teknik tambahan. Ini akan membolehkan anda menentukan ketepatan maksimum tahap kerosakan kepada tubuh dan kemungkinan komplikasi. Ia dengan pendekatan ini untuk diagnosis boleh membincangkan tentang rawatan yang berkesan terhadap penyakit ini.

PCR untuk tuberkulosis - diagnosis tuberkulosis

PCR untuk tindak balas rantai tuberkulosis atau polimerase adalah cara yang paling moden dan maju untuk mendiagnosis penyakit. Apakah kelebihannya berbanding dengan kaedah lain, dan adakah ia benar-benar membenarkannya?

Tuberkulosis adalah penyakit berjangkit yang sangat serius yang membunuh berjuta-juta orang. Dan kini penderitaan khianat ini berjalan di planet ini, menghancurkan keluarga dan bahkan seluruh penempatan.

Di negara beradab, banyak kaedah inovatif digunakan untuk mendiagnosis jangkitan pada peringkat awal, yang memungkinkan untuk menahan serangan penyakit mematikan. Salah satu kaedah ini adalah ujian darah PCR untuk tuberkulosis.

Bagaimana ia berfungsi, dan mengapa pemaju teknik ini menjamin banyak kelebihan penciptaan mereka?

Intipati kaedah diagnosis

PCR, atau sebaliknya, tindak balas rantai polimerase adalah kaedah yang agak baru dan inovatif dengan cara sendiri, yang memungkinkan untuk mengenal pasti agen penyebab penyakit berjangkit dalam masa beberapa jam.

Darah dari urat kebanyakannya digunakan sebagai bahan untuk penyelidikan, tetapi bahan biologi lain juga ada, seperti:

  • air liur;
  • air kencing;
  • mengikis benar-benar mana-mana bahagian badan;
  • pelepasan dari alat kelamin;
  • najis;
  • cecair tunjang.

Oleh itu, kelebihan PCR adalah faktor-faktor berikut:

  • Mutlak, 100 peratus pengesanan mikobakteria dalam bahan biologi, kecuali bakteria yang anda cari sebenarnya ada di dalam tubuh manusia.
  • Mengeluarkan maklumat bukan hanya mengenai ketersediaan, tetapi juga pada jumlah bacilli dalam sampel yang di bawah kajian.
  • Kelajuan tinggi penyelidikan yang diperlukan. 4 jam dan hasilnya tepat diketahui.
  • Pengesanan bukan sahaja agen penyebab tuberkulosis, tetapi juga bakteria asal lain. Ia amat penting untuk menyerlahkan fakta bahawa kaedah ini juga mendedahkan jangkitan HIV.
  • Pemeriksaan terperinci paru-paru, yang tidak mungkin jika anda menggunakan ujian darah lain untuk mikobakteria.
  • Berfungsi pada tahap DNA, yang bermaksud menjamin hasil yang tepat.

Diagnosis PCR tuberkulosis mendedahkan kecenderungan untuk menjangkiti penyakit sebelum diketahui oleh kajian lain, seperti fluorografi.

Itulah, sebenarnya, dengan bantuan teknik baru, adalah mungkin untuk meramal masa depan - adakah seseorang menjadi sakit tuberkulosis selepas beberapa waktu, atau tidak? Dan tidak kira sama ada ujian itu dilakukan pada orang dewasa atau kanak-kanak.

Pada masa yang sama, pada peringkat awal penyakit, adalah mungkin untuk menentukan asal usul mikobakteria yang menyebabkan jangkitan, serta sifatnya (penentangan terhadap ubat-ubatan kumpulan tertentu, keboleh surviviti, dan sebagainya).

Mengetahui hampir segalanya tentang penyakit ini, anda boleh membuat rancangan yang paling berkesan untuk memerangi penyakit yang sedia ada. Juga menggunakan analisis PCR, menjadi mungkin untuk melindungi pesakit dari orang yang sihat pada waktu yang tepat, sehingga mencegah penyebaran jangkitan lebih lanjut.

Bagaimana akan biomaterial

Analisis PCR adalah prosedur yang sangat rumit, walaupun hanya mengambil masa 4 jam secara purata. Ketepatan keputusan boleh dipengaruhi oleh pelbagai faktor yang mungkin kelihatan seperti hal kecil kepada lelaki biasa. Satu faktor sedemikian ialah pengumpulan sampel untuk penyelidikan.

Sesungguhnya, ia mungkin kelihatan tidak sukar, dan sesiapa sahaja, walaupun seorang kanak-kanak, boleh mengatasinya.

Malah, apabila mengumpul sampel untuk mendiagnosis tuberkulosis, satu peraturan yang sangat penting perlu dipatuhi: adalah perlu bahawa semua orang harus berinteraksi apabila mengumpul ujian harus steril atau secukupnya.

Sebagai contoh, apabila menggunakan darah dari vena sebagai biomaterial, analisis itu diambil oleh seorang pakar yang berpengalaman dengan picagari steril.

Sampel dikumpulkan dalam tiub ujian dan sepanjang keseluruhan kajian dikendalikan dalam keadaan khas yang menghalang pembekuan darah.

Ujian air kencing untuk mycobacterium tuberculosis biasanya diambil pada waktu pagi apabila seseorang bangun dan pergi ke tandas. Dalam kes ini, bekas untuk mengumpul sampel mestilah steril, dan sebelum mengumpulnya adalah perlu untuk menjalani prosedur air.

Pengikatan genital lelaki dan wanita dilakukan oleh doktor yang sesuai dalam kemudahan perubatan.

Pengumpulan ujian kompleks, contohnya, cairan tulang belakang tunjang, dijalankan oleh pakar yang berkelayakan di bawah keadaan keadaan mantap.

Biasanya, PCR darah untuk tuberkulosis ditetapkan dalam kes berikut:

  • selepas menerima hasil kontroversi selepas fluorography;
  • pada kecurigaan sedikit demi sedikit untuk mengesan patologi terlebih dahulu dan mengambil langkah yang sesuai;
  • jika seseorang hidup dikelilingi oleh saudara-mara dengan tuberkulosis.

Rujukan untuk ujian PCR boleh diperolehi daripada pakar perubatan seperti ahli pulmonologi, pakar TB atau terapi. Diagnosis tuberkulosis pada kanak-kanak oleh PCR biasanya ditetapkan oleh pakar pediatrik.

Bagaimana PCR dilakukan

Ujian darah untuk tuberkulosis bukan prosedur mudah. Ini disebabkan oleh pelbagai aspek, pematuhan yang wajib. Ini adalah yang pertama. Kedua, proses menganalisis darah untuk tuberkulosis melibatkan tindakan yang kompleks dan manipulasi dengan sampel.

Oleh kerana kajian menunjukkan hubungan rapat dengan proses di peringkat DNA, pakar memerlukan tumpuan maksimum apabila bekerja dengan biomaterial.

Ringkasnya, gambaran keseluruhan keputusan adalah seperti berikut:

  1. Dengan manipulasi mekanikal dan kimia, bahan yang diperlukan dibebaskan dari sampel.
  2. Kemudian proses diagnostik memerlukan kerja dengan DNA patogen, iaitu, perlu untuk memulakan reaksi berantai DNA dua kali ganda.
  3. Selanjutnya, pelbagai tindak balas rantai DNA ditambah dalam urutan tertentu, yang membentuk satu cip.
  4. Peringkat terakhir adalah penyahsulitan data dan penerbitan keputusan.

Harus diingat bahawa penanda pada akhirnya dapat memberikan dua jenis jawapan: sederhana atau kompleks. Mudah adalah positif atau negatif. Keputusan yang sukar diperoleh dengan menguraikan unsur-unsur DNA yang teruk, tetapi sebagai tambahan kepada maklumat mengenai kehadiran atau ketiadaan mycobacterium tuberculosis dalam tubuh, maklumat tambahan dapat diperolehi.

2 kekurangan PCR untuk tuberkulosis: ujian darah untuk diagnosis

Jangkitan tuberkulosis tertentu telah wujud dalam tisu manusia dan struktur selama bertahun-tahun, dan dalam keadaan tertentu ia menyebar dengan cepat ke seluruh badan dalam 2-3 bulan. Kadang-kadang sangat sukar untuk memilih kursus rawatan optimum kerana diagnosis lewat dan penyesuaian patogen kepada banyak ubat-ubatan.

Diagnosis PCR terbaru dari tuberkulosis membantu mengesan bukan sahaja penyakit maju, tetapi juga patogen itu sendiri, apabila tanda-tanda awal penyakit belum muncul.

Apakah PCR?

Diagnosis tuberkulosis oleh PCR telah muncul baru-baru ini. Pada tahun 1983, ahli mikrobiologi dari Amerika, Cary Mullis, mencipta prosedur yang mana mikroorganisma boleh dibina semula daripada bahan biologi dalam segmen pendek. Kerja ini telah menerima Hadiah Nobel.

PCR untuk tuberkulosis adalah proses rantai polimer di mana diagnosis dan pengesanan patogen virus oleh kejuruteraan genetik. Teknik ini digunakan dalam makmal imunologi, mikrobiologi, virologi dan biokimia.

Kaedah sejagat membantu doktor mendiagnosis dan mengesan proses menular walaupun selepas jam pertama jangkitan, jauh sebelum timbulnya gejala. Penyelidikan adalah mungkin walaupun dengan sedikit biomaterial.

Apa yang diperlukan untuk analisis?

  • Beberapa kepingan DNA (primer), yang mana sintesis biologi bermula;
  • Sebatian nukleotida, asas molekul DNA atau RNA;
  • Enzim polimerase yang mempercepat analisis PCR.

Apakah asas kaedah itu?

Pertama, satu segmen DNA diekstrak daripada bahan biologi daripada orang yang dijangkiti, menggunakan kaedah biosintesis gen-molekul, jenis mikroorganisma yang mana kepunyaan biofragment ditentukan selanjutnya.

Reaksi kompleks ini mengambil sedikit masa daripada beberapa biomethods. PCR menentukan patogen dalam beberapa jam, sementara tidak ada keperluan untuk mengasingkannya dari cecair biologi (sputum, serebrospinal atau media darah), tidak perlu membesarkannya dalam masa yang lama dalam medium nutrien. Adalah cukup bahawa bahan yang dikaji mengandungi sehelai DNA patogen berjangkit.

Apabila melakukan ujian darah PCR untuk tuberkulosis secara in vitro, sintesis asid ribonukleik tuberkulosis mycobacterium dicipta secara buatan.

Tahap diagnosis

Reaksi molekul oleh PCR adalah prosedur mudah yang memerlukan sedikit masa. Biomaterial yang diperlukan diambil: darah, sputum, cecair penyemburan bronkial digunakan untuk menentukan tbc.

  1. Pertama, bentuk utama DNA dimusnahkan, 2 rantai dipisahkan pada suhu tinggi (maksimum 98 ° C tidak melebihi 2 minit);
  2. Kemudian annealing dilakukan, suhu utama dikurangkan oleh beberapa bahagian, helai DNA dikaitkan dengan primer;
  3. Peringkat seterusnya dipanggil pemanjangan, dengan biosintesis struktur molekul yang diperlukan.

Untuk mendapatkan jumlah salinan DNA yang diperlukan, 25 hingga 30 kitaran mesti lulus, dan jumlah mikobakteria yang dihasilkan mudah dikenali.

Adakah perlu melakukan PCR untuk tuberkulosis?

Secara langsung kepada semua pesakit yang disyaki TVC, diagnosis rantaian tidak dilakukan, kerana prosedur memerlukan penggunaan peralatan mahal. Tidak semua institusi negeri perubatan membiarkannya dibeli, terutamanya kerana kaedah biasa mendiagnosis mycobacterium tuberculosis juga bermaklumat.

  • Berhati-hati pengambilan anamnesis, soal siasat pesakit;
  • Pemeriksaan visual;
  • Ujian tuberkulin Mantoux;
  • Pemeriksaan radiografi atau radiografi;
  • Jika perlu, diagnostik komputer;
  • Pemeriksaan mikroskopik atau bakteriologi topeng dengan sputum.

PCR untuk tuberkulosis hanya dilakukan apabila tidak mungkin untuk melakukan analisis instrumental yang lain atau dalam keadaan yang sukar didiagnosis.

Walaupun mereka telah mencipta pelbagai jenis kaedah diagnostik, bilangan pesakit dengan tuberkulosis terus berkembang. Di samping itu, insiden telah memperoleh beberapa ciri: bentuk penyakit yang teruk sering diperhatikan, bilangan kematian meningkat, patogen menjadi tahan terhadap ubat kemoterapi yang sedia ada.

Ramai orang tidak mahu menjalani pemeriksaan rutin setiap tahun, menolak vaksinasi, yang membawa kepada peningkatan kejadian. Keadaan sedemikian memerlukan kaedah penyelidikan yang berkesan dan bermaklumat yang disediakan untuk orang dewasa dan kanak-kanak yang didiagnosis dengan tbc. PCR mempunyai kelebihan berbanding kaedah diagnostik lain.

Apakah nilai kaedah?

Kajian terbaru ini telah terbukti dengan baik. Jika untuk beberapa sebab sukar untuk membuat diagnosis atau, dalam beberapa kes kontroversi, PCR mengesan bacillus tuber lebih mudah dalam bahan biologi daripada kaedah lain.

  • Kajian ringkas ini, satu segmen kecil molekul yang memungkinkan untuk membuat diagnosis yang tepat dalam masa yang singkat dalam kira-kira 5 jam, ini digunakan dalam kes-kes kecemasan, sebagai contoh, sebelum campur tangan pembedahan segera;
  • Ujian darah untuk tuberkulosis adalah mungkin apabila kaedah lain tidak tersedia atau dikontraindikasikan - kadang kala, untuk mengesan patogen tbc, terdapat banyak imej Rg yang akan diambil, dos radiasi yang terlalu tinggi;
  • Menggunakan tindak balas polimerase, mana-mana cecair biologi boleh diperiksa untuk kehadiran mikobakteria. Sebagai contoh, anda boleh menjalankan kajian cecair cerebrospinal dalam meningitis atau air kencing yang berbahaya dalam batuk kering urogenital;
  • Kaedah ini selamat, diagnosis tuberkulosis pada kanak-kanak yang menggunakan PCR tidak menyebabkan kesukaran;
  • Kaedah tindak balas polimer mendedahkan bacillus tubercle dalam sebarang bentuk dan peringkat penyakit;
  • Kehadiran hanya beberapa bakteria dalam biomaterial membolehkan anda melihat kehadiran mikroorganisma, kerana ini adalah tindak balas sensitif;
  • PCR dengan mudah mendiagnosis pengulangan penyakit ini.

Walaupun terdapat banyak kelebihan, semua pesakit yang disyaki belajar tbc tidak dilakukan, kerana terdapat juga kekurangan, mereka juga diambil kira.

Video

Video - diagnosis awal

Apakah kelemahannya?

Kaedah diagnosis ini agak luar biasa daripada alam, kerana ini ada sebab. Pertama sekali, kos tinggi kaedah itu diambil kira. Peralatannya mahal, klinik awam tidak mempunyai peluang untuk membeli kerana harga yang tinggi, tetapi kebanyakan makmal yang dibayar mempunyai peralatan, analisis dilakukan di dalamnya.

  • Kaedah mengesan bakteria terbunuh yang telah meninggal dunia selepas rawatan, sementara PCR menunjukkan hasil yang positif. Sejurus selepas kemoterapi, ia tidak masuk akal untuk menjalankan kajian, kerana hasilnya tidak boleh dipercayai;
  • Mutasi Mycobacterium tuberculosis adalah mudah terdedah, yang menyebabkan ketidakcekapan kaedah dan strand DNA tidak boleh disintesis secara konsisten.

Persekitaran untuk kajian itu perlu dipilih dengan teliti, darah atau air kencing hanya boleh dikumpulkan jika terdapat kecurigaan jangkitan. Pankre tidak boleh diambil untuk pemeriksaan jika tuberkulosis tulang disyaki. Dalam keadaan ini, diagnosis akan menjadi salah.

Darah dan air kencing pesakit dengan batuk yang dikaji di PCR jarang diambil, pengenalan penyakit dengan cara ini adalah dipersoalkan. Dalam biomedia, patogen ini hanya ditentukan dalam sepsis, atau dalam kes tuberkulosis yang disebarkan. Bentuk tempatan adalah yang paling biasa, dengan darah dan air kencing mereka tetap tidak berubah. Selalunya, dada diambil untuk pemeriksaan.

Siapa yang menunjukkan analisis?

Kebanyakan pesakit dihantar untuk diagnosis PCR dalam kes kontroversi dan kesukaran tuberkulosis. Bilakah profesional perubatan mengemukakan rujukan untuk penyelidikan?

  1. Sekiranya terdapat hubungan dengan seseorang yang telah dihidapi secara diagnosis dengan tuberkulosis, tetapi sukar untuk mendiagnosis menggunakan kaedah konvensional;
  2. Dalam keadaan tersebut, jika pesakit untuk menyediakan klinik adalah mustahil untuk radiografi atau kajian lain. Dalam situasi sedemikian, lebih mudah untuk memeriksa menggunakan kaedah polimer. Analisis sputum hanya dihantar ke makmal di dalam bekas khas, dan hasilnya diketahui selepas beberapa jam;
  3. Sebelum pembedahan, sangat diperlukan untuk menentukan sama ada pesakit sakit tuberkulosis, di mana PCR ditunjukkan;
  4. Oleh kerana keselamatan kaedah ini, mungkin dilakukan pemeriksaan seorang wanita hamil atau anak, tanpa membuat tambahan x-ray beban;
  5. Keputusan ujian Mantoux yang ragu-ragu.

Sesiapa yang mahu boleh diperiksa dengan bayaran jika tuberkulosis belum disahkan dengan bantuan bakteria dan fluoroskopi. Ini berlaku jika luka dalam tisu paru-paru tidak kelihatan dalam imej Rg dalam satu unjuran langsung, dan pesakit tidak dapat mengumpul sputum dengan betul, tetapi tanda-tanda tuberkulosis manusia terganggu.

Reaksi PCR moden untuk diagnosis adalah kunci kepada rawatan yang berjaya, sebagai akibatnya kelaziman penyakit berkurangan. Kaedah tradisional mengenalpasti penyakit tidak selalu menghasilkan kesan yang diingini.

Diagnosis PCR tuberkulosis pulmonari pada kanak-kanak dan orang dewasa: apakah itu dan bagaimana hendak dilakukan?

Reaksi rantai polimerase (PCR) adalah kaedah yang moden dan berkesan untuk mendiagnosis banyak penyakit, termasuk batuk kering. Prosedur ini membolehkan anda dengan cepat menentukan agen penyebab pelbagai penyakit. Akibatnya, PCR untuk tuberkulosis membantu pesakit dan doktornya pada masa untuk memulakan terapi untuk patologi yang dikenal pasti.

Kaedah penyelidikan

Diagnosis PCR tuberkulosis akan memerlukan pengumpulan awal bahan. Cecair biologi berikut sesuai:

  • darah;
  • air kencing;
  • najis;
  • sputum;
  • mengikis mana-mana organ;
  • cecair kemaluan;
  • cecair serebrospina.

Pada masa yang sama, ketepatan hasil yang diperoleh bergantung pada bahan yang diambil untuk kajian ini. Selalunya ujian seperti tuberkulosis melibatkan pengambilan darah, air kencing atau dengung dari pesakit. Dalam kes ini, hasil yang paling boleh dipercayai boleh diperolehi dalam kes di mana bahan tersebut adalah dahak.

Fakta adalah bahawa dalam media biologi, jangkitan jenis ini muncul sama ada dalam sepsis atau dalam tuberkulosis yang disebarkan. Dengan bentuk tempatan yang berlaku lebih kerap dalam analisis darah dan air kencing, tidak mungkin ada perubahan.

Bagaimana diagnosis PCR itu sendiri

Untuk menjalankan kaedah penyelidikan sedemikian, anda mesti terlebih dahulu mengambil satu atau bahan lain. Selepas itu, dia masuk ke ruang khas yang dipanggil penguat. Ia dinamakan dengan cara ini kerana alasan di sini bahawa rantaian DNA berganda, yang membolehkan keputusan positif atau negatif selanjutnya.

Peranti moden bukan sahaja melakukan tindak balas rantai polimerase, tetapi juga memberikan hasil kaji selidik. Pada masa akan datang, penyahsulitan mereka dijalankan oleh doktor TB. Pesakit harus datang ke pakar ini dengan ekstrak, yang menunjukkan hasil kajian.

Dalam kes ini, doktor menggunakan sistem penilaian berikut:

  • kurang daripada 0.9 unit relatif menunjukkan hasil negatif;
  • dari 0.9 hingga 1.1 unit relatif menunjukkan hasil yang diragukan;
  • lebih daripada 1.1 unit relatif menunjukkan hasil positif kajian, iaitu, kehadiran tuberkulosis.

Akibatnya, doktor dengan mudah dapat menentukan kehadiran atau ketiadaan agen penyebab penyakit dalam bahan ujian.

Siapa yang perlu dihubungi untuk analisis?

Pada masa ini, terdapat beberapa pakar yang boleh menetapkan versi kajian yang sama.

Yang utama ialah doktor berikut:

Walaupun setiap pakar ini boleh menetapkan PCR untuk diagnosis tuberkulosis, hanya seorang doktor TB yang dapat menilai keputusan analisis sedemikian dan menetapkan diagnosis akhir.

Di samping itu, dia akan menetapkan rawatan yang diperlukan, menentukan dengan tepat di mana dia harus pergi (di rumah atau di hospital khusus), dan juga menyediakan pesakit dengan semua cadangan yang diperlukan untuk perubahan gaya hidup.

Kelebihan dan keburukan teknik ini

Analisis PCR untuk tuberkulosis mempunyai beberapa kelebihan yang menarik kedua-dua pesakit dan pakar. Yang utama ialah yang berikut:

  1. Analisis ini memberikan hampir 100% pengesanan agen penyebab penyakit dalam bahan biologi yang dikumpulkan. Agar peranti menghasilkan hasil positif, cukup untuk mempunyai hanya 10-100 sel Mycobacterium tuberculosis.
  2. Hasilnya selepas ujian darah atau dada dilakukan akan siap setelah 4-5 jam. Kaedah lain untuk menentukan kehadiran Mycobacterium tuberculosis dalam media biologi mungkin memerlukan menunggu dari beberapa minggu hingga 1 bulan.
  3. Risiko rendah hasil palsu. Ini adalah kerana kekhususan DNA yang agak tinggi yang mempunyai agen penyebab tuberkulosis.
  4. Ia adalah mungkin untuk mengesan DNA mycobacterium dalam tuberkulosis pulmonari. Dengan bantuan kaedah penyelidikan makmal yang lain untuk mencapai keputusan sedemikian hampir mustahil.

Satu lagi kelebihan besar yang menyediakan proses diagnostik sedemikian adalah keupayaan untuk menentukan rintangan bakteria kepada satu atau lain antibiotik. Akibatnya, analisis darah atau sputum yang sama membolehkan anda menentukan ubat yang paling sensitif terhadap Mycobacterium tuberculosis.

Mengkaji pembaca kami - Anastasia Makarova

Baru-baru ini, saya membaca artikel mengenai koleksi Biara Bapa George untuk rawatan dan pencegahan tuberkulosis. Dengan koleksi ini, anda tidak boleh hanya mengubati tuberkulosis, tetapi juga memulihkan paru-paru di rumah.

Saya tidak pernah mempercayai apa-apa maklumat, tetapi saya memutuskan untuk menyemak dan mengarahkan pembungkusan. Saya perhatikan perubahan seminggu kemudian: Saya berasa lonjakan kekuatan dan tenaga, selera saya bertambah baik, batuk saya dan sesak nafas berundur, dan selepas 2 minggu mereka hilang sama sekali. Analisis saya kembali normal. Cuba dan anda, dan sesiapa yang berminat, maka pautan ke artikel di bawah.

Pada masa yang sama, pilihan penyelidikan ini membolehkan untuk mewujudkan kestabilan tersebut hanya selama 2 hari. Pilihan tinjauan lain tidak menyediakan ciri yang sama. Istilah untuk mewujudkan kerentanan terhadap ubat antibakteria tertentu, jika ujian darah biasa diambil, boleh mencapai 1 bulan.

Siapa yang sedang diadakan?

PCR tuberkulosis juga bagus kerana ia boleh dilakukan dalam kumpulan pesakit berikut:

  • Pada kanak-kanak;
  • Pada pesakit yang mempunyai imunodefisiensi.

Diagnosis tuberkulosis pada kanak-kanak menggunakan kaedah penyelidikan ini sering digunakan. Dalam kes ini, lebih kerap untuk tujuan ini ujian darah dijalankan, bukannya dahak. Ini disebabkan oleh hakikat bahawa tidak selalu kanak-kanak, terutama yang kecil, dapat betul-betul mengikut arahan pakar untuk mendapatkan dahak yang cukup dari sistem pernafasan.

Sekiranya ada keperluan segera bagi bronkoskopi untuk mendapatkan bahan biologi tersebut. Seorang kanak-kanak, dan juga orang dewasa, mengalami variasi penyelidikan yang sukar, oleh itu ia hanya dijalankan dalam kes-kes yang luar biasa.

Ini disebabkan oleh fakta bahawa mereka telah mengurangkan keterukan tindak balas imun terhadap jangkitan. Darah pesakit tersebut mengandungi sejumlah kecil antibodi. Di samping itu, kanak-kanak yang mempunyai imuniti yang lemah tidak digalakkan untuk membuat tinjauan menggunakan reaksi Mantoux. Diagnostik PCR untuk mereka adalah cara yang sangat baik daripada keadaan yang sukar.

Kelemahan utama

Di samping kelebihan yang tidak diragukan, kaedah penyelidikan ini mempunyai kelemahannya. Yang utama ialah yang berikut:

  • jika darah tidak mengandungi DNA mycobacterium tuberculosis, maka ini benar-benar tidak menunjukkan ketiadaan penyakit;
  • dalam kes bentuk tuberkulosis tempatan, biasanya tidak mungkin untuk mewujudkan kehadiran DNA dalam mana-mana media biologi menggunakan tindak balas rantai polimerase;
  • pada peringkat awal penyakit, DNA mycobacterium tuberculosis dalam pelbagai media biologi biasanya tidak hadir.

Akibatnya, kajian ini mungkin berlaku untuk orang yang mengalami kekurangan atau dalam kes-kes dengan pesakit yang berada dalam keadaan serius.

Di samping itu, tindak balas rantai polimerase yang sangat berharga menjadi diagnosis tuberkulosis pulmonari untuk kanak-kanak yang dikontraindikasikan dalam kaedah diagnostik lain.

Dalam kes lain, kelakuannya mesti ditambah dengan kaedah lain.

Marilah kita ketahui mengenainya - letakkan penarafanDownload...